氧化应激检测与氧化应激标志物

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活性氧簇 (ROS)

活性氧簇 (ROS) 是含氧的反应性化学物质， 包括过氧化物、超氧化物、羟基自由基、单线态氧和 α-氧。

由于活性氧簇具有瞬态性，所以使用基于荧光显色染料的检测方法（例如 DCFDA）可以在活细胞中轻松测定活性氧簇。 但在组织和生物体液样本中较难测定活性氧簇。

DNA/RNA 损伤、脂质过氧化和蛋白质氧化/硝化

测定氧化应激时，可以通过测定 DNA/RNA 损伤、脂质过氧化和蛋白质氧化/硝化水平间接测定，而非直接测定活性氧簇。 这些氧化应激标志物的活性比活性氧簇更持久。

DNA/RNA 损伤

有多种 DNA/RNA 损伤可以用作氧化应激标志物。8-羟基脱氧鸟苷 (8-OHdG) 可能是用于测量氧化应激的最常用 DNA 损伤标志物。 彗星检测、无嘌呤/无嘧啶位点检测和醛诱导损伤检测可以间接测定可能与氧化应激相关的 DNA 损伤。

脂质过氧化

丙二醛 (MDA) 是最常用的氧化应激脂质标志物。 由多不饱和脂肪酸过氧化形成，通常使用 TBARS 检测进行定量检测。 也可使用竞争 ELISA 检测测定 MDA。 其他脂质过氧化标志物包括 4-HNA、8-异前列腺素、脂质氢过氧化物和氧化 LDL。

TBARS 检测

TBARS 检测并非只对 MDA 有特异性，其他醛类也会在该检测中产生信号。 但是在测定 MDA 时，TBARS 检测通常比使用 HPLC 更方便。 TBARS 检测（硫代巴比妥酸反应物检测）可测定细胞和组织提取物以及生物体液中的主要脂质氧化产物 MDA（丙二醛）的水平，以及一些相关次要化合物的水平。 这种水平通常被视为反映生物样本中氧化应激水平的良好指标。

在该检测中，硫代巴比妥酸与 MDA 反应形成红色产物，该产物可使用比色 (OD = 532 nm) 或荧光 (Ex/Em 532/553 nm) 酶标仪检测。

为获得可靠的 TBARS 检测结果，推荐使用脂质过氧化 (MDA) 检测试剂盒 (ab118970) 或替代型 MDA 检测试剂盒 ab233471。 该试剂盒涵盖充分优化的实验方案，以及用于检测的关键试剂，包括实现定量测定的 MDA 标准品。

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蛋白质氧化/硝化

蛋白质的氧化损伤表现为蛋白质羰基化和蛋白质硝化（3-硝基酪氨酸）。 活性氧簇还会导致形成晚期糖基化终末产物 (AGE) 和晚期氧化蛋白产物 (AOPP)。 所有这些标志物都可以通过标准检测测定。

抗氧化剂

抗氧化酶和其他氧化还原分子会抑制可以引起氧化损伤的 ROS。 有三种类型的抗氧化剂可用作氧化应激标志物：小分子、酶和蛋白质（如白蛋白）。

测定样本总抗氧化能力（包括基于小分子和蛋白抗氧化剂的能力）的检测方法有很多种。 Trolox 当量抗氧化能力检测法 (TEAC) 是最常见的总抗氧化能力检测法之一。 氧自由基抗氧化能力 （ORAC） 检测 是另一种常见的 氧化应激 检测 法，通过测定 抗氧化剂 减少 荧光的 ROS 荧光染料淬灭的能力来测量抗氧化能力。

抗氧化活性还可以通过测定特定分析物的水平来进行测定， 例如观察 GSH 和 GSSG 的相对水平。 谷胱甘肽 (GSH) 被视为内源性抗氧化剂中含量最丰富的分子，其氧化型为 GSSG。 谷胱甘肽还原酶可以实现谷胱甘肽的循环利用。

GST 和超氧化物歧化酶等抗氧化酶的活性水平可以根据氧化应激水平进行测定。

客户评价

我们目前正在使用产品 [ab113851] 来检测小神经胶质细胞受刺激物激活后 24 小时的活化情况。 该产品得到的结果高度一致，并且使用起来非常简便。

Neal Bennett，ab113851