用于重染色的蛋白质印迹膜再生（membrance stripping）方案

​​我们的蛋白质印迹膜再生和重染色实验方案包括从蛋白质印迹膜上除去抗体的逐步细节。

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​膜再生是用于描述从蛋白质印迹膜上除去一抗和二抗的术语。在同一印迹上研究一种以上的蛋白质（例如目标蛋白和上样对照）时，膜再生非常有用。在检测多个靶标时，不需要电泳和印迹多块凝胶，而是在一张膜上进行再生和重新检测，这具有节约样品和材料、节省时间的优点。

不建议在膜再生前后对检测靶标进行定量比较，因为膜再生过程会从膜上除去部分样品蛋白质。同样，不应检测再生膜来证明蛋白质的缺失。

强烈推荐可尽量降低样品蛋白质损失的 PVDF 膜。还应注意，比色/显色检测试剂会在膜上留下永久可见的印迹，可能干扰相似分子量靶标的后续检测。推荐例如 ECL 的化学发光试剂，因为它们不会留下印迹，并且比比色试剂更敏感。

以下两个实验方案的区别在于处理的强度。根据一般经验，首先尝试较温和的实验方案，如果仍有试图除去的抗体信号，再进行高强度的实验方案。这些步骤可重复用于与多个抗体杂交的情况，但每次膜再生之后潜在的信号可能更弱，背景可能更高。有些研究人员报道了膜再生十次或更多之后成功染色的示例。

可通过用化学发光检测试剂孵育膜来检查再生效率。如果再生效果令人满意，用缓冲液冲洗膜若干次，然后在孵育抗体前进行封闭。