为了使您在Abcam官网的浏览体验更顺畅,请使用最新版本的浏览器比如 Google Chrome
Take a look at our BETA site and see what we’ve done so far.
Search and browse selected products
Purchase these through your usual distributor
将细胞或组织样品在裂解缓冲液中匀浆,裂解缓冲液需新鲜制备,加入蛋白酶抑制剂(检测磷酸化蛋白时还应加入磷酸酶抑制剂)。
一旦开始裂解,蛋白水解、去磷酸化和变性也随即开始。始终将样品置于冰上或维持在 4 °C,并在一开始就向裂解缓冲液中新鲜加入合适的抑制剂,能够显著减缓这些反应。
使用加入了新鲜蛋白酶和磷酸酶抑制剂的 RIPA 或 NP40 缓冲液。
研究磷酸化时,请记得向裂解液中加入磷酸酶抑制剂
使蛋白保持在磷酸化的状态!加入充足的磷酸酶抑制剂,并始终将样品置于冰上。
使用 5% w/v BSA (fractionV) 而非牛奶(牛奶中包含的酪蛋白是一种磷酸化蛋白;而抗体会检测牛奶中的酪蛋白导致高背景)封闭膜。
请记住磷酸化可能需要被诱导。信号弱或无信号可能意味着诱导不充分。建议使用推荐的阳性对照。