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小鼠抗小鼠 (MOM) 染色方案

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​​使用小鼠单克隆抗体对小鼠组织进行染色时去除背景着色的技巧。

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使用小鼠抗体染色小鼠组织是一个复杂的过程,因为经常观察到高水平的背景着色。消除该背景非常困难。

大部分背景是由与被染色组织中的内源性小鼠 IgG 结合的二抗以及与 B 细胞、浆细胞和巨噬细胞上的 Fc 受体结合的二抗引起的。

​​​​Abcam提供了强大的一步法试剂盒,可以在小鼠组织上使用小鼠抗体。 ab127055 - 小鼠抗小鼠聚合物 IHC 试剂盒 是一种基于聚合物的系统,具有更高的灵敏度,可节省时间且检测简便。 

​​​或者,如果您选择不使用小鼠抗小鼠聚合物 IHC 试剂盒,下文提供几条尝试减少背景的技巧。

​​封闭内源性 IgG

  1. 常规准备组织切片。
  2. 常规封闭步骤中,在室温下用血清(来自与二抗相同的种属)封闭 30 分钟。
  3. 用 PBS Tween 20 洗 3×2 分钟。在室温下使用未偶联的亲和纯化 F(ab) 片段抗小鼠 IgG (H+L) 孵育切片 1 小时,或在 4℃ 下孵育整夜。该封闭抗体试用浓度为 0.1 mg/ml,不过最佳浓度需要由最终用户确定。
  4. 继续进行抗体染色。

封闭内源性 Fc 受体

Fc 受体存在于巨噬细胞和单核细胞等几种细胞类型上,并且可以结合抗体且加重背景着色。我们建议使用 F(ab) 单体二抗来减少背景着色。


可减少一般背景着色的其他技巧:

  • 用 1% Triton(加入 PBS)在室温下孵育切片 30 分钟以“清洁”组织。
  • 使用 TBS-Tween 20 作为洗涤缓冲液,该法通常比使用 PBS-Tween 20 时的背景着色更少。
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