小鼠抗小鼠 (MOM) 染色方案
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使用小鼠单克隆抗体对小鼠组织进行染色时去除背景着色的技巧。
使用小鼠抗体染色小鼠组织是一个复杂的过程，因为经常观察到高水平的背景着色。消除该背景非常困难。
大部分背景是由与被染色组织中的内源性小鼠 IgG 结合的二抗以及与 B 细胞、浆细胞和巨噬细胞上的 Fc 受体结合的二抗引起的。
Abcam提供了强大的一步法试剂盒，可以在小鼠组织上使用小鼠抗体。 ab269452 - 小鼠抗小鼠聚合物 IHC 试剂盒 是一种基于聚合物的系统，具有更高的灵敏度，可节省时间且检测简便。
或者，如果您选择不使用小鼠抗小鼠聚合物 IHC 试剂盒，下文提供几条尝试减少背景的技巧。
封闭内源性 IgG
- 常规准备组织切片。
- 常规封闭步骤中，在室温下用血清（来自与二抗相同的种属）封闭 30 分钟。
- 用 PBS Tween 20 洗 3×2 分钟。在室温下使用未偶联的亲和纯化 F(ab) 片段抗小鼠 IgG (H+L) 孵育切片 1 小时，或在 4℃ 下孵育整夜。该封闭抗体试用浓度为 0.1 mg/ml，不过最佳浓度需要由最终用户确定。
- 继续进行抗体染色。
封闭内源性 Fc 受体
Fc 受体存在于巨噬细胞和单核细胞等几种细胞类型上，并且可以结合抗体且加重背景着色。我们建议使用 F(ab) 单体二抗来减少背景着色。
可减少一般背景着色的其他技巧：
- 用 1% Triton（加入 PBS）在室温下孵育切片 30 分钟以“清洁”组织。
- 使用 TBS-Tween 20 作为洗涤缓冲液，该法通常比使用 PBS-Tween 20 时的背景着色更少。