活细胞荧光激活细胞分选术
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本文介绍了用于活细胞群的荧光激活细胞分选术相关内容。
用于活细胞的荧光激活细胞分选术 (FACS) 根据荧光标记将一个细胞群分为多个亚群。在流式细胞仪中，这种分选的机制相比非分选分析更为复杂。根据所染荧光团的类型，可将荧光团偶联抗体染色细胞彼此分离。例如，表达一种细胞标记物的细胞可通过识别该标记物的 FITC-偶联抗体进行检测，而表达另一种细胞标记物的细胞则可使用特异性识别该标记物的 PE-偶联抗体进行检测。这是流式细胞仪的基本功能。
更进一步的活细胞分选：
- 一般的流式细胞仪中，单个细胞会被激光“询问”。
- 设置仪器，使每个单独的细胞从喷嘴流出时，呈单液滴通过。根据液滴中细胞的荧光赋予相应的电荷。
- 偏向板吸引或排斥液滴，将其分选到不同的收集管中。
例如：
单液滴中 FITC 染色的单个细胞被赋予正电荷，并被吸到右侧。右侧的收集管将收集所有带正电荷的 FITC 染色细胞液滴。
单液滴中 PE 染色的单个细胞被赋予负电荷，并被吸到左侧。左侧的收集管将收集所有带负电荷的 PE 染色细胞液滴。 - 然后，分析已分选的细胞群，确保细胞分选成功。
- 最后，对分选的细胞进行培养。
用于培养的细胞需有活性，并且未被污染。请参见下面的提示。
- 在缓冲液中加入血清。
- 用于染色的缓冲液中不得添加叠氮化钠，叠氮化钠对细胞有毒性，会影响细胞活力。
- 实验应在无菌消毒条件下进行，确保细胞不受污染。
- 通常，活细胞分选前不能进行细胞内染色，因为透化步骤会破坏细胞膜，影响细胞活力。