使用血球计数器进行细胞计数

使用血球计数器对悬浮细胞进行活细胞计数的实验方案

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准备血球计数器

1.  如果使用玻璃血球计数器和盖玻片，请在使用前用酒精清洁。用水润湿盖玻片，并将盖玻片固定到血球计数器上。如果盖玻片下出现牛顿折射环，则表明盖玻片已正确附着。
2.  如果使用一次性血球计数器（例如 INCYTO DHC-N01），只需在使用前将其从包装中取出。

准备细胞悬液

1. 轻轻旋转培养皿 ，确保细胞均匀分布。
2. 在细胞沉降前，用 5 mL 无菌移液器吸取 0.5 mL 细胞悬液并置于 Eppendorf 管中。
3. 取 100 µL 细胞放入新的 Eppendorf 管中，加入 400 µL 0.4% 台盼蓝（最终浓度 0.08%）。轻轻混合。

计数

1. 使用移液器取 100 µL 台盼蓝处理的细胞悬液，置于血球计数器上。如果使用玻璃血球计数器，则轻轻填满盖玻片下的两个室，使细胞悬液通过毛细管作用吸出。如果使用一次性血球计数器，则将细胞悬液加入计数室的孔中，使细胞悬液通过毛细管作用被吸入。
2. 使用显微镜，在 10x 物镜下对焦到血球计数器的网格线。
3. 使用手动计数器，对由16个方块组成的一组方块中未染色的活细胞（活细胞不能被台盼蓝染色）计数（图 1）。计数时，只计方块内或右边界及下边界线上的细胞。按同样的方法，必要时也可计数台盼蓝染色的死细胞以估计活细胞的比例。
4. 移动血球计数器到下一组方块（16 个），继续计数，直至所有 4 组方块（每组16 个）均计数完毕。

活力

计算活细胞数量/mL：

1. 计算每组方块（16 个）中细胞计数的平均值。
2.  乘以 10000 (10⁴)。
3.  乘以 5，以修正加入台盼蓝时的 1:5 稀释。

最终值即是原细胞悬液中的活细胞数量/mL。

例：

• ·如果每 16 个方块的细胞计数是 50、40、45、52，则平均细胞计数为：
• (50 + 40 + 45 +52) ÷ 4 = 46.75
• 46.75 x 10000 (10⁴) = 467500
• 467500 x 5 = 原细胞悬液中 2337500 个活细胞/mL

计算活力：

如果记录了每组（16 个）角落方块中的活细胞和死细胞数量，则可计算活力。

1.   将活细胞和死细胞计数相加，得到总细胞计数。
2.  活细胞计数除以总细胞计数即计算出百分比活力。

例：

• 活细胞计数：2337500 个细胞/mL
•  ​死细胞计数：50000 个细胞/mL
• 2337500 + 50000 = 2387500 个细胞
• 2337500 ÷ 2387500 = 97.9% 活力

图 1. 血球计数器网格线。
​​血球计数器示意图，显示用于计数的一组（16 个）方块。