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127 mM NaCl
1.0 mM KCl
1.2 mM KH2PO4
26 mM NaHCO3
10 mM D-glucose
用精密天平称取盐配制 2 L 人工脑脊液 (aCSF) 溶液。加入约1.9 L的去离子水,充分摇匀,确保所有盐均溶解。用混合氧 95% O2/5% CO2 向 aCSF 充气 15-20 分钟并将 pH 稳定在 7.3-7.4。随后采用合适的移液管加入 4.8 ml 1M CaCl2 和 2.6 ml 1M MgCl2,最终浓度为:
2.4 mM CaCl2
1.3 mM MgCl2
去离子水定容至 2 L。用混合氧再充气 15 分钟。
140 mM Potassium gluconate
10 mM KCl
1 mM EGTA-Na
10 mM HEPES
4 mM Na2ATP
0.3 mM Na2GTP
用 0.5M KOH 将 pH 调至 7.3,用 1M 蔗糖调整渗透压。
提示:很重要的一点是,在切割过程中向保存室中不断地注入冷却的 aCSF 溶液以保持脑组织冷却。
如果不熟悉脑解剖,可使用参考资料如 Paxinos 和 Watson 的 Rat Brain Atlas,以确保切割正确的大脑区域。
图像:Rat Brain Atlas 的图 35
提示:很重要的一点是,确保采用批次特定分子量来测定测试化合物的准确浓度。请参见我们关于小分子的常见问题以获得更多信息。
查看我们的 IHC 实验方案。
致谢
这项视频实验方案由 Abcam 与 NeuroSolutions 合作完成。