Anti-Tenascin C抗体[T2H5] (ab3970)

Te agradezco mucho que te hayas tomado el tiempo para enviarnos los detalles e imágenes del protocolo.  Lamentablemente no puedo abrir los archivos de las imágenes, por lo que te agradecería que nos las volvieras a enviar.
Me comentabas en tu primer mail que otro lote de este anticuerpo os funcionó en el pasado, ¿se usaron las mismas muestras y el protocolo seguido fue el mismo?
¿Qué muestras se están utilizando? ¿Habéis comprobado la expresión de la proteína en las mismas? ¿y qué controles positivos se han usado?.
Para detectar esta proteína recomendamos usar condiciones reductoras, y para ello un agente reductor, tal como DTT o BME sería adecuado.
Otra sugerencia es usar un agente de bloqueo más suave, como BSA al 5%, y bloquear durante una hora a TA.
Aunque es obvio, solo por confirmar, ¿el anticuerpo secundario es un anti Mouse? ¿Se ha usado este anticuerpo con otros primarios y se ha comprobado su funcionamiento?
Actualmente el único lote en stock que tenemos de este anticuerpo corresponde con la alícuota 6 , no queda ninguna alícuota 1 disponible. Sin embargo tenemos otra serie de alternativas contra la misma proteína, también validados en WB, que podríamos enviaros en caso de que no se consiguiera optimizar el resultado de éste.  Podéis echar un vistazo a las datasheets de las mismas accediendo al siguiente enlace:
https://www.abcam.com/index.html?pageconfig=searchresults&search=Tenascin C&pt=1&sk=react&sv=21&sn=Human&l=3&fViewMore=1
Así pues, os deseo mucha suerte, y espero vuestra respuesta.

Gracias por contactarnos.

Siento mucho que estéis teniendo problemas con este anticuerpo. He comprobado nuestro registro de reclamaciones de otros clientes, así como los resultados de los controles de calidad realizados, y no parece que haya ninguna anomalía con este producto.

En ocasiones lotes concretos pueden dar resultados más inespecíficos que otros, pero en este caso me sorprende ya que mencionas que el lote anterior (XXXXX) había proporcionado los resultados esperados. En realidad ambos lotes son el mismo, la diferencia (el 1 o el 2 después del guión) es que son diferentes alícuotas del mismo lote.

Si te parece podemos echar un vistazo a los resultados obtenidos, así como al protocolo seguido. Para ello te envío un cuestionario que se rellena en pocos minutos, y que nos resulta muy útil a la hora de entender qué ha podido pasar para que el anticuerpo no se comporte como se espera.

Si nos envías alguna imagen, especialmente comparando ambas alícuotas, te lo agradezco. ¿Habéis usado exactamente los mismos reactivos / membranas / muestras, etc… en ambos ensayos?

De todas maneras, todos los productos tienen una garantía de 6 meses, y si finalmente el problema radicase en el vial enviado, no habrá ningún problema en reemplazarlo o reembolsarlo.

Quedo pues a la espera de tu respuesta para ayudarte a solucionar el problema lo antes posible.

Muchas gracias por tu respuesta.

Es importante que todos los anticuerpos que escojas para llevar a cabo IHC-P en tejido humano estén validados (y por tanto garantizados por Abcam) para funcionar en esta especie y aplicación. Esta información aparece en la hoja técnica de los productos.

También es importante echar un vistazo a las hojas de datos de cada uno de los productos para tener en cuenta recomendaciones especificas, tales como diluciones, métodos de recuperación antigénica, y demás que pueden aparecer en ellas. A las fichas técnicas se puede acceder desde la página web, escribiendo el código del anticuerpo (ab955, por ejemplo) en la casilla azul en la parte de arriba de nuestra página web (https://www.abcam.com/).

Desconozco las combinaciones que queréis llevar a cabo mediante inmunofluorescencia doble con los anticuerpos mencionados. En general, a la hora de hacer inmunoensayos múltiples hay que tener mucha precaución para evitar reactividad cruzada. Es importante usar anticuerpos procedentes de distintas especies si se puede, o al menos con diferentes isotipos. Una buena forma de evitar reactividad cruzada es usando secundarios de la misma especie. Además esto permite usar suero de dicha especie para bloquear.

Te copio los links a los protocolos que tenemos en nuestra web para llevar a cabo doble inmunofluorescencia por s pudieran resultar de ayuda:

https://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=11459

https://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=11458

De todas maneras si quieres que comentemos distintas posibilidades y escenarios posibles, no dudes en contactarme otra vez.

Respecto a los secundarios, tenemos muchos anticuerpos que podrían serviros. Te aconsejo que en función de los primarios y combinaciones que vayáis a llevar a cabo, optéis por uno u otro. Para llevar a cabo la búsqueda de los secundarios desde la pagina web (https://www.abcam.com/) pincha en la pestaña “Secondary Antibodies”. Se abre una nueva ventana de “Advance Search”, en la cual se pueden elegir las categorías requeridas. La única categoría obligatoria es el isotipo del anticuerpo, pues tiene que coincidir con el del primario. El resto de categorías son opcionales, pero son muy útiles para afinar la búsqueda y elegir el anticuerpo más apropiado según la especie del primario, la conjugación deseada, la clonalidad, la aplicación en la que se va a testar, etc…

Los precios y la disponibilidad pueden consultarse igualmente en la parte superior de la datasheet de los productos. Si necesitas un presupuesto no dudes en hacérmelo saber para que te lo envíe. Además tenemos algún descuento para pedidos superiores a 5 productos, por lo que si vais a realizar un pedido de estas características te animaría a que nos contactaras primero.

Espero que esta información sea de ayuda. Como te digo, para cualquier aclaración o más sugerencias, estaré encantada de echar una mano.

Thank you for your patience. I have contacted the originators of ab3970, ab6393, and ab7839 and have received the following replies: ab3970 - This antibody reacts with tenascin; it was raised against mammary tumor of human origin. Tenascin-C could be the alternate name of tenascin: Tenascin-C (Tn) is the best characterized member of the tenascin family of cell-adhesion proteins - Alternate names of tenascin C: tenascin; cytotactin; hexabrachion. ab6393 - The epitope recognized by this antibody is common to all Tenascin isoforms. Thus, the antibody will recognize Ten-C along with the other isoforms of tenascin. ab7839 - No reply. I have recontacted them. I hope this information helps. If I receive additional information on ab7839, I will e-mail it to you. Please do not hesitate to contact us again if you have additional questions.

Thank you for your recent phone call and your interest in our tenascin and myosin heavy chain antibodies. As we discussed we do not currently have antibodies which have been tested in chicken tissue and the homology searches revealed that for tenascin there is 64% identity between the human precursor form (immunogen of our tenascin antibodies) and the chicken precursor form. This is not extremely high and therefore our antibodies do not have high chances of cross reacting with chicken tissue. You may find better antibodies for chicken tissue on biocompare.com or at the bottom of the search for tenascin on our website a link to the World's antibody gateway which looks at 149 other online antibody companies. I am trying to find out more information about the immunogen sequence for the myosin heavy chain antibodies to work out the homology between the immunogen and the chicken protein, my apologies for the delay.

Thank you for the details of your protocol, my apologies for the delay due to a long bank holiday weekend in the UK. This antibody has been tested in IHC on formalin-fixed paraffin embedded tissue, I would therefore suggest using formalin fixation as it is possible that ethanol fixation is not sufficient to fix the proteins. Please also use PBST with triton to dilute the primary and secondary antibodies. You may also find the references below useful: Gulubova M Immunohistochemical localization of collagen type III and type IV, laminin, tenascin and alpha-smooth muscle actin (alphaSMA) in the human liver in peliosis. Pathol Res Pract 198:803-12 (2002). PubMed: 12608657 Ioachim E et al. Immunohistochemical expression of extracellular matrix components tenascin, fibronectin, collagen type IV and laminin in breast cancer: their prognostic value and role in tumour invasion and progression. Eur J Cancer 38:2362-70 (2002). PubMed: 12460779 Faustino AM et al. Tenascin expression in normal, hyperplastic, dysplastic and neoplastic canine mammary tissues. J Comp Pathol 126:1-8 (2002). PubMed: 11814316 Tokes AM et al. Immunohistochemical localisation of tenascin in invasive ductal carcinoma of the breast. Anticancer Res 19:175-9 (1999). PubMed: 10226540 Please do not hesitate to contact us if you still have problems,

Thank you for your enquiry. Unfortunatly the epitope has not been mapped yet. My apologies for the inconvenience,