Anti-SREBP2抗体(ab30682)

Ich möchte vorschlagen, dass Sie die Kreuzreaktion zu vermerken, damit anderen Kunden wissen, dass mit Merschweinchenproben mit Problemen zu rechnen ist.

Vielen Dank für Ihre Anfrage.
Die Interpretation Ihrer Ergebnisse ist wirklich nicht einfach! Ich hoffe, dass ich Ihnen trotzdem ein wenig weiterhelfen kann:
Zuerst möchte ich fragen, welche unserer SREBP- Antikörper Sie verwendet haben. Aus unseren Unterlagen entnehme ich, dass es vermutlich ab3259 und ab30682 waren. Können Sie das bestätigen?
Ich stimme Ihnen vollkommen zu, dass es kein Zeichen guter wissenschaftlicher Praxis ist, bei der Veröffentlichung von Daten keine Angabe zum Molekulargewicht zu machen! Das einfachste wäre hier vielleicht für Sie, die Autoren direkt zu kontaktieren und nach der Größe von SREBP2 (Precursor und geschnittene Form) zu fragen.
Bei meinen Recherchen konnte ich herausfinden, dass das Immunogen von ab30682 eine Sequenzähnlichkeit von 100% gegenüber dem vermuteten Ortholog des Meerschweins aufweist (Cavia porcellus, SwissProtID H0VN68, http://www.uniprot.org/uniprot/H0VN68, siehe auch Anhang). Daher ist es sehr wahrscheinlich, dass der Antikörper kreuzreagiert, auch wenn wir das bisher nicht getestet haben (und daher leider auch nicht garantieren können).
Um nun zu bestimmen, welche Bande die richtige ist, gäbe es verschiedene Möglichkeiten:
1) Haben Sie ein no-primary-Kontrolle durchgeführt? So könnte man die Banden bestimmen, die durch unspezifische Bindung des Sekundärantikörpers verursacht werden.
2) Aus unbekannten Gründen ergeben Antikörper mit verschiedenen Blockierungsmitteln unterschiedliche Ergebnisse. Vielleicht verbessert eine Blockierung mit 5% Milchpulver (und dann dementsprechend 0-0.5% Milchpulver im Antikörperverdünnungspuffer) die Signale, so dass die spezifische Bande stärker wird (die ich übrigens auch bei unter 72 kDa vermuten würde).
3) Um Unterschiede zu erkennen, würde ich Ihnen empfehlen, Gesamtzelllysate, Kernextrakte und eventuell die cytoplasmatische Fraktion auf dasselbe Gel aufzutragen. Dies würde dann das shuttling zwischen ER/Golgi und Kern zeigen. Das gleiche gälte für behandelte Proben: Wenn Sie die Möglichkeit hätten, die Expression bzw. Prozessierung von SREBP2 zu induzieren (mit TCDD?), könnte das zur Klärung beitragen.
4) Es gäbe auch die Möglichkeit, dass Sie Ihre Proben mit alternativen Antikörpern gegen ein anderes Epitop auf SREBP2 testen, um die bisherigen Ergebnisse zu bestätigen. Unsere anderen Antikörper wurden zwar bisher noch nicht im Meerschwein getestet; allerdings weisen alle Immunogen eine Ähnlichkeit von 92-100% auf und können daher kreuzreagieren.
ab28482:
https://www.abcam.com/SREBP2-antibody-ab28482.html https://www.abcam.com/SREBP2-antibody-ab28482.html.
ab72856:
https://www.abcam.com/SREBP2-antibody-ab72856.html https://www.abcam.com/SREBP2-antibody-ab72856.html.
ab112046:
https://www.abcam.com/SREBP2-antibody-ab112046.html https://www.abcam.com/SREBP2-antibody-ab112046.html.
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