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荧光基团简介

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了解荧光团用途如此广泛的原因以及如何利用荧光团的强大特性。

在流式细胞术等应用中,荧光团(或荧光染料)常用作检测试剂与抗体偶联。荧光团可以吸收和发射一定波长范围的光,通常称为吸收(激发)和发射光谱。

图例。上:荧光团的激发和发射基础原理。1) 荧光团吸收特定波长的光能;2) 光吸收诱导荧光团的电子激发;3) 电子恢复基态后,荧光团将以更长的波长重新发射吸收的光能。下:FITC 的激发和发射光谱。

单击此处了解更多有关激发后荧光团发生变化的信息。

串联染料

多色套装的设计常会用到串联染料,这类染料由两种不同的荧光团共价结合而成。其中一个荧光团(供体)提供激发特性,另一个荧光团(受体)则提供发射特性。例如,在 PE-Cy7 中,藻红蛋白 (PE) 和 Cy7 分别用作供体和受体荧光团。因此,PE-Cy7 同时具有 PE 的激发特性和 Cy7 的发射特性。

图例。上:串联染料的激发和发射基础原理。1) 供体荧光团吸收特定波长的光能;2) 供体激发后,能量会转移到邻近的受体上,这一过程称为 Förster 现象或荧光共振能量转移。3) 受体荧光团以荧光的形式发射转移的能量。下:PE-Cy7 的激发和发射光谱。

串联染料可提高套装的容量和灵活性

使用串联染料后,单一激光可以激发多种荧光团,分别由不同的检测器进行检测。例如,Alexa Fluor® 488、PE、PerCP-Cy5.5 及 PE-Cy7 均可由蓝色的激光 (488 nm) 激发。但是,这些串联染料将分别产生绿色、黄色、紫色和红外发射光。

图例。Alexa Fluor® 488、PE、PerCP-Cy5.5 及 PE-Cy7 经蓝色激光 (488 nm) 激发的激发和发射光谱。

以下是一些关于如何处理串联染料的提示和技巧:

  • 串联染料需避光保存,否则容易发生光漂白。
  • 切勿冷冻串联染料抗体偶联物,否则供体荧光团可能变性。
  • 尽可能减少样品固定和透化操作,否则会降低荧光团亮度。
  • 由于批间偏差较高,针对每一批次的样品都需进行优化。
  • 由于 FRET 的效率不可能达到 100%,因此可能会观察到部分供体的串色激发。
  • 在 4°C 下标记细胞,以避免串联染料降解或解耦。


相关资源:


Alexa Fluor® 是 Life Technologies 的注册商标。Alexa Fluor® 染料偶联物包含由 Life Technologies 授权给 Abcam 的技术。





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