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查看如何利用重组单克隆抗体得到项目所需的可重复性结果
2022 年 3 月 18 日更新
生产重组抗体时,需要先将抗体编码基因克隆到高产率表达载体中,再将其导入表达宿主。
重组单克隆抗体由靶向相同表位的相同抗体链组成,可提高可重复性,并且供货稳定,灵敏度增强,特异性已得到确认。
重组抗体克服了其他抗体生产方法的局限性,例如遗传漂移(在抗体生产中会造成细微差异)。目前,靶向高难度靶点,如毒素、核苷酸和膜结合蛋白的抗体很难用这种 in vivo 模型生产出来。使用重组抗体可以给您带来以下优势:
由于重组抗体是使用一组独特的基因表达形成的,因此它的生产是可控且可靠的。重组抗体的批间一致性非常高,这也意味着您可以得到您的研究或药物开发研究所需的 高可重复性结果。
图 1.5 个批次的 PD-L1 [28-8] 重组兔单抗 (ab205921) 在 FFPE 人胎盘中定位 PD-L1 的批间可重复性。IHC 使用 Biocare Decloaking Device 和 通用 HIER 抗原修复试剂 (ab208572) 手动开展。将一抗置于 4°C 下孵育过夜,随后用山羊抗兔二抗和 HRP 偶联抗山羊聚合物抗体 (ab209101) 进行孵育。用 DAB 染色,并用苏木精复染。
KD 值是抗体亲和力的定量检测值。KD 值越低,抗体亲和力越高。我们的 PDL1 重组抗体的 KD 值分析结果表明,5 个不同批次抗体的亲和力都很高(表 1)。
表 1.5 个不同批次的 PD-L1 重组抗体 [28-8] (ab205921) 的 KD 值分析。如需了解有关 KD 值的更多信息,请查看 我们的 KD 指南。
抗体 | KD (M) |
PD-L1_批次 1 | 4.74E-11 |
PD-L1_批次 2 | 3.83E-11 |
PD-L1_批次 3 | 2.04E-11 |
PD-L1_批次 4 | 2.40E-11 |
PD-L1_批次 5 | 2.13E-11 |
由于所需克隆体是在杂交瘤和重组克隆阶段选出,所以我们能够选择最优质的抗体。此外,为了增强结果的可信度,我们开展了广泛的验证,包括基因敲除验证,以便确保我们重组抗体的特异性。
我们的重组兔单抗的 KD 值平均在皮摩尔(10-10–10-12)范围内,说明亲和力非常高。与亲和力低的抗体相比,亲和力高的抗体在检测中的灵敏度更高,因为它们能够与抗原紧密结合并且能够在困难条件下更好地保护结合键。
以下实例展示了重组抗体和其他抗体类型之间的特异性差异。
图 2.TLE 1 重组抗体 [EPR9386(2)] (左)与 TLE 1 [OTI1F5] 单抗在基因敲除样本和野生型样本上的测试结果对比。
图 3.GRIM19 重组抗体 [EPR4471(2)] (左)与 TLE 1 [OTI1F5] 单抗在基因敲除样本和野生型样本上的测试结果对比。
生产重组抗体时,需要将抗体基因克隆到表达载体中。这意味着重组抗体可以实现任何规模的表达,并且保证长期供应,让您更加安心地持续开展各种规模的项目研究,因此,重组抗体是长期研究以及在多个样本中使用相同抗体的研究的绝佳解决方案。
一旦分离出产生抗体的基因,就可以实现高通量 in vitro 生产。对于使用我们的噬菌体展示技术产生的抗体,其基因也可以用无动物程序分离。
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