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使用重组抗体,做好成功准备。
概述
将抗体基因克隆到高收率表达载体中,即可 in vitro 生产重组单抗。再将这些载体引入表达宿主中,用于生产重组抗体。
相比之下,单克隆抗体是在免疫动物 B 细胞与骨髓瘤融合形成永生细胞时,采用杂交瘤技术生成的。虽然这项技术可大量生产一致性高、特异性强、灵敏度高的单克隆抗体,但是,随着时间的推移,杂交瘤细胞系会出现基因漂移,导致生产的抗体出现轻微变化。目前,靶向高难度靶点,如毒素、核苷酸和膜结合蛋白的抗体很难用这种 in vivo 模型生产出来。
重组抗体克服了其他抗体生产方法的局限性,可实现最高水平的批间一致性、领先的可重复性,且特异性已经确认,可保证长期供应。
由于重组抗体是从一组独特的基因中开发出来的,所以重组抗体的生产是可控且可靠的。可以避免杂交瘤生产过程中的一些问题,如基因丢失、基因突变及细胞系漂移。因此,抗体的批间一致性非常高,可以为您提供您的研究或药物开发研究所需的高可重复性结果。
图 1.在 western blot 中利用多个样本类型对我们的抗 Bcl-XL 重组兔单克隆抗体 — ab178844(左)和引用度较高的竞争产品 Bcl-XL 兔多克隆抗体进行了对比检测。看看我们的蛋白质印迹实验方案。
采用重组技术,更容易通过抗体工程提高抗体灵敏度。所需克隆体在杂交瘤和重组克隆阶段进行选择,这样我们能够选择最优质量的抗体。
为了确保特异性,我们采用了大量验证方法,包括基因敲除验证,以提高结果的可靠性。以下案例证明,基因敲除样本没有出现预期的分子量条带,因此重组抗体与其他类型抗体之间的特异性存在差异:
图 2.我们利用基因敲除样本和野生型样本对我们的 TLE 1 重组抗体 [EPR9386(2)](左)和 TLE 1 [OTI1F5] 单克隆抗体进行了测试。
图 3.我们利用基因敲除样本和野生型样本对我们的重组 GRIM19 [EPR4471(2)] 抗体(左)和单克隆 GRIM19 [6E1BH7] 抗体进行了测试。
KD 值是抗体亲和力的定量测度。KD 值越低,抗体亲和力越高。我们的重组兔单抗的 KD 值平均在皮摩尔(10-10–10-12)范围内,说明亲和力非常高。
与亲和力低的抗体相比,亲和力高的抗体在检测中的灵敏度更高,因为它们能够与抗原紧密结合并且能够在困难条件下更好地保护结合键。我们的 PDL1 重组抗体的 KD 值分析结果表明,5 个不同批次抗体的亲和力都很高(表 1)。
抗体 | kon(1/Ms) | kdis(1/s) | KD (M) | 全 R^2 |
PD-L1_批次 1 | 8.22E+05 | 3.90E-05 | 4.74E-11 | 0.999 |
PD-L1_批次 2 | 6.17E+05 | 2.36E-05 | 3.83E-11 | 0.9997 |
PD-L1_批次 3 | 6.92E+05 | 1.41E-05 | 2.04E-11 | 0.9991 |
PD-L1_批次 4 | 6.14E+05 | 1.48E-05 | 2.40E-11 | 0.9996 |
PD-L1_批次 5 | 7.21E+05 | 1.54E-05 | 2.13E-11 | 0.9994 |
表 1. 5 个不同批次的 PD-L1 重组抗体 [28-8] (ab205921) 的 KD 值分析。如需了解有关 KD 值的更多信息,请查看我们的 KD 指南。
由于抗体基因是单独分离的且序列已知,所以可以进行任何规模的抗体表达,并且,可以保证抗体长期供应。对长期研究或者针对多个样本使用同一抗体的研究而言,重组抗体会很棒。
一旦分离出产生抗体的基因,就可以实现无动物成分 体外 生产。对于使用我们的噬菌体展示技术产生的抗体,其基因也可以用无动物成分的程序分离。