重组抗体：高可重复性、高特异性
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重组抗体可以为您提供高标准的批间一致性，让您远离断供困扰，同时还能设计灵敏度和特异性。
单克隆抗体，通常是使用免疫动物的 B 细胞制备永生化杂交瘤细胞，分泌所需的抗体。杂交瘤技术可大量生产一致性高、特异性强、灵敏度高的单克隆抗体。但是，随着时间的推移，杂交瘤细胞系会变得不稳定，整个过程费时费力，且操作步骤多，存在污染的风险。目前，人们对高难度靶点（如毒素、核苷酸和膜结合蛋白）的抗体需求日益增加，而这类抗体很难用这种模式生产出来。
重组抗体克服了体杂交瘤生产单克隆抗的诸多限制。
什么是重组抗体？
重组抗体在体外构建，其生产不依赖动物的免疫系统。该技术是将免疫特异性的重链和轻链抗体基因克隆到高产表达载体，这些载体通过不同宿主（例如细菌、酵母或哺乳动物）表达，生产重组单克隆抗体。在应用上，使用传统单克隆抗体的地方都可以使用重组抗体。
重组抗体的优势
与传统的单克隆和多克隆抗体相比，重组抗体具有多个优点：
更高的一致性和可重复性
由于重组抗体是通过特定表达载体开发生产的，所以整个过程是可控且可靠的。它避免了杂交瘤生产过程中的一些问题，如基因丢失、基因突变及细胞系漂移。这也使得抗体的批间差异非常小，从而为您提供高可重复性的实验结果。
图 3.我们在WB中应用多个样本类型对我们的 Bcl-XL 重组兔单抗-ab178844（左）和市面上引用率较高的 Bcl-XL 兔多克隆抗体进行对比检测。点击查看我们的 WB protocol。
更高的灵敏度和特异性
利用重组技术，更容易通过抗体工程提高抗体的特异性和灵敏度。克隆的选择过程发生在杂交瘤和重组克隆阶段，这样我们能够选择最优质量的抗体。
限制小
通过表达载体，抗体的生产能够以任何规模在比杂交瘤技术更短的时间内进行。这意味着我们可以在数周而不是数月内生产抗体。
无动物高通量生产
一旦构建好表达载体，就可以实现无动物体外生产。对于使用噬菌体展示技术产生的抗体，其基因也可以用无动物程序分离。
重组 RabMAb® 兔单克隆抗体
为了向您提供灵敏度极好、一致性更高的抗体，我们开发了 RabMAb 重组兔单克隆抗体。它具有多个独特优势。
目前，我们拥有超过 10,000 种 RabMAb 重组兔单抗，而且还提供 RabMAb定制开发服务。
表 1.重组抗体和 RabMAb 抗体的优势
RabMAb 兔单克隆抗体 | 重组抗体 |
低背景 | 高一致性和可重复性 |
高特异性 | 更高的灵敏度 |
高亲和力（高达 10-12 kD） | 更高的特异性 |
多种表位识别 | 无动物生产 |
除了上述双重优势，RabMAb重组兔单抗还
在关键应用（WB、IHC、ICC/IF、IP 和流式细胞术）和物种（人、小鼠和大鼠）中进行了验证。
经亲和纯化，去除了所有可能导致非特异性信号的杂质
噬菌体展示技术的重组抗体
体外噬菌体展示技术和文库加快了重组单克隆抗体的筛选、验证和生产，并且可以靶向高难度靶标。以抗白喉毒素的重组单克隆抗体为例。
图 1.白喉毒素人源单抗 (ab209329)：由于毒性作用，很难免疫动物使用体内抗毒素方法生产抗体，因此我们使用体外展示文库分离抗体。
我们的噬菌体展示依赖于一个大型的噬菌体颗粒库（> 1010 个克隆），每个噬菌体颗粒均携带遗传信息和一个抗体克隆的独特表型结合功能。我们使用的文库是 M13 噬菌粒文库，抗体的多样性局限于天然抗体序列互补决定区 (CDR) 中变化最多的位置。该法将文库中亲本克隆的数量限制在 1% 以下。筛选步骤如下：
- 在ELISA 板上捕获靶蛋白或多肽筛选噬菌体展示文库
- 清洗板，去除非特异性结合因子
- 洗脱特异性噬菌体展示结合因子，并转导至细菌细胞中进行扩增
- 重复淘选/筛选（步骤 1 和 2）两次，以确保每个克隆均为纯品
- 通过结合试验（如 ELISA）确认靶特异性
- 克隆分离后-对抗体基因序列进行设计，再将其插入到哺乳动物或细菌表达载体中，用于大规模生产重组单克隆抗体，随后在相关检测（如蛋白质印迹、免疫荧光、流式细胞术和免疫组织化学）中进行验证
图 2. 噬菌体展示过程示意图。
有关我们噬菌体展示重组抗体技术的精选参考文献
- pMINERVA: A donor-acceptor system for the in vivo recombineering of scFv into IgG molecules.J Immunol Methods.2016 Apr; 431:22-30, Batonick M. et al.
- Generating Recombinant Antibodies to Membrane Proteins through Phage Display, Antibodies 2016, 5(2), Huang R. et al.
- AXM mutagenesis: an efficient means for the production of libraries for directed evolution of proteins.J Immunol Methods.2013 Aug 30;394(1-2):55-61.Holland EG.et al.
- Use of micro-emulsion technology for the directed evolution of antibodies. Methods. 2012 Sep; 58(1):28-33. Buhr DL, et al.