KD 值：抗体亲和力的定量测定

KD 值和抗体亲和力指南。

​我们已经系统地测定了超过 840 种 RabMAb 抗体（Abcam 的兔单克隆抗体系列）的 KD 值（抗体及其抗原之间的平衡解离常数），用以评估其个体 KD 值，并观察 RabMAb 抗体的平均亲和力。与已发表文献载明的小鼠单克隆抗体值的比较结果显示，RabMAb 抗体的亲和力平均提高了 1-2 个数量级（图 1）。

​图 1：RabMAb 抗体与小鼠单抗 的 KD 分布对比：本次对比选用的 88 种小鼠单抗的 KD 值来自已发表的文献。每种小鼠单抗的 KD 值可能都已经使用了多种方法和步骤进行了单独测定。863 种 RabMAb 抗体的 KD 值均通过 OI-RD 测定项目测定。

​什么是 KD？它与抗体亲和力和敏感性有何关系？

KD 是抗体与其抗原之间的平衡解离常数，即 koff/kon 的比。KD 与亲和力成反比。KD 值与抗体的浓度（特定实验所需的抗体量）有关，因此 KD 值越低（浓度越低），抗体的亲和力越高。

KD 值

摩尔浓度（敏感性）

10-4 至 10-6

微摩尔（µM）

10-7 至 10-9

纳摩尔（nM）

10-10  至 10-12

皮摩尔（pM）

10-13  至 10-15

飞摩尔（fM）

 表 1：KD 和摩尔值

KD 值如何测定？

​相关测定与加州大学戴维斯分校物理系 J. Landry 和 X. Zhu 合作完成。OI-RD（斜入射反射率差）以及亲和力数据的数据处理、数据分析和报告生成在加州大学戴维斯分校物理系测定，并在发布前交由 Abcam 的科学家进行了测定置信度审查。

​阅读有关此新型抗体 KD 测定方法的详细信息。​​

如何读取 KD 值

​为了确保您能够查看各抗体的 KD  测定值，已在各抗体产品页添加各抗体的特定 KD 值和对应图示。​​

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​​图 2：KD 值图表说明：

  1. ​基线 - 无抗体
  2. ​缔合反应 (Kon) - 该反应旨在计算“缔合速率”（Kon），用于表征抗体与其靶标结合速度的常数。零时注入特定浓度的抗体溶液，并在肽微阵列上运行 15 分钟。
  3. 解离反应 (Koff) - 该反应旨在计算“解离速率”（Koff），用于表征抗体与其靶标解离速度的常数。

    斜率平缓 = 解离速率缓慢/抗体结合较强

    下降趋势明显 = 解离速度较快/抗体结合较弱

    在虚线处，将溶液换回空缓冲溶液并运行肽微阵列。

  4. ​每种抗体采用多种不同的浓度进行测试，每种浓度对应图中的不同颜色曲线。此外，每个肽点均加倍印刷在微阵列上，从而形成单独的曲线。
  5. ​实验测定的解离和缔合速率 (Koff/Kon) 用于计算 KD 值。​

KD 值-FAQ

  1. KD 值代表什么？如何计算？
  2. KD 值和抗体亲和力之间是什么关系？
  3. 抗体的典型 KD 值是多少？理想的 KD 值是多少？
  4. KD 值如何测定？
  5.  该方法与其他 KD 测定方法（如 Biacore）相比表现如何？


KD  值代表什么？如何计算？

​KD 系指抗体从其抗原解离的速率 (koff)与抗体与抗原缔合的速率 (kon) 之间的比值。网站上列出的 KD  值系通过测定特定抗体/抗原相互作用的 kon 和 koff，然后根据所得值之间比率确定的。

KD 值和抗体亲和力之间是什么关系？

​亲和力系指单个分子与其配体结合的强度，通常通过平衡解离常数 (KD) 进行测定和报告，平衡解离常数可用于评估两分子间相互作用的强度并对此进行排序。抗体与其抗原的结合是一个可逆的过程，结合反应的速率与反应物的浓度成正比。​​

平衡时，[抗体] [抗原]复合物的形成速率与其解离成其组分[抗体] + [抗原]的速率相等。测定反应速率常数可定义平衡或亲和力常数 (1/KD)。简而言之，KD 值越小，抗体对其靶标的亲和力越大。

抗体的典型 KD  值是多少？理想的 KD 值是多少？

​大多数抗体的 KD 值都在低微摩尔 (10-6) 至纳摩尔 (10-7 至 10-9) 范围内。人们通常认为，高亲和力抗体处于低纳摩尔范围内 (10-9)，而亲和力非常高的抗体处于皮摩尔范围内 (10-12)。采用 OI-RD 进行 850 多次测定后得出，RabMAb 抗体的中值 KD 值约为 7 x 10-11 M，表明 RabMAb 抗体普遍具有很高的亲和力。

KD 值如何测定？

​KD 值采用加州大学戴维斯分校物理系 James Landry 博士和 Xiangdong Zhu 博士开发的新型无标记检测系统测量。这是一个基于微阵列的系统，并且结合了基于偏振调制斜入射反射率差 (OI-RD)（参考）的无标记光学扫描仪。

了解 OI-RD 方法。


该方法与其他 KD 测定方法（如 Biacore）相比表现如何？

​使用 OI-RD 或 Biacore 仪器对六个独立的抗体-抗原对进行动力学测量。在该实验中，双倍抗原被捕获到固体支持物上。通过注射四种浓度的 RabMAb 抗体产生结合数据。用于拟合实验数据的模型为 1-比-1 Langmuir，并使用整体曲线拟合分析。比较分析结果汇总参见表 2 和图 2。结果表明，各分析方法之间具有极好的相关性，并且在一个数量级内。

抗体

OI-RD KD (M)

Biacore KD (M)

EGFR

8.5E-12

1.9E-11

Glut-1

2.4E-11

7.7E-12

CD34

4.1E-11

1.2E10

Glucagen

7.0E-11

3.3E-10

Cytokeratin 15

2.5E-10

5.6E-10

表 2：使用 OI-RD 和 Biacore 获得的 KD 测定结果比较。

参考文献