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IHC 二抗

使用间接法检测抗原时,选择合适的二抗至关重要。

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​​与使用直标一抗进行直接法检测抗原不同,使用二抗可以放大信号,那是由于是多个二抗分子可以与单个一抗分子结合。

二抗应能识别相对应的一抗(例如,如果使用的一抗来源于兔子,那就必须使用来源是兔子以外的物种产生的抗兔二抗。二抗的同型与一抗的同型匹配同样十分重要。

二抗可以是酶标记的抗体(过氧化物酶、碱性磷酸酶)、荧光素标记的抗体 (FITC、R-PE、Alexa-Fluor®) 或生物素标记的抗体。

关于在ABC法(avidin-biotin 复合物)检测过程中用到的生物素标记的二抗系列,请查看 此处。


IHC常用二抗


Secondary antibody

HRP

Biotin

山羊抗兔 (IgG H&L)

ab205718

ab207995

山羊抗小鼠 (IgG H&L)

ab205719

ab207996

山羊抗大鼠 (IgG H&L)

ab205720

ab207997

山羊抗鸡 (IgG H&L)

ab205721

ab207998

                                      

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一般而言,经亲和纯化的抗体最受欢迎用得最多,这是因为这些抗体出现非特异性结合的几率最低。但是,IgG 组分也可能含具有很高亲和力的抗体,因而可能在应对抗原表达量较低或抗原丰度较低的情况下很有帮助。

二抗的预吸附处理可以减少非特异背景,这是因为这些二抗不太可能表现出种属交叉反应性,或不太可能与预吸附处理物种的内源性抗原产生反应。在二抗中应把实验所用样本的种属免疫球蛋白预吸附掉。例如,在对来源于人的组织或细胞系进行染色时,建议使用经人血清预吸附处理过的二抗。

更多关于预吸附抗体的信息,您可以查看 此处。
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F(ab’)2 片段化二抗

推荐使用 F(ab’)2 片段化二抗染色富含 Fc 受体的组织(如脾脏、胸腺、血液)。F(ab’)2 片段化二抗较小,因此更容易穿透组织,特别适用于多重 IHC 染色。

二抗可以是酶标记抗体(过氧化物酶、碱性磷酸酶)、荧光素标记抗体 (FITC、R-PE、Alexa-Fluor®) 或生物素标记抗体。关于在ABC法(avidin-biotin 复合物)检测过程中用到的生物素标记的二抗系列,请查看此处.

检测低表达蛋白所用的 HRP-聚合物二抗

为了获得更高的灵敏度, HRP-聚合物二抗使用微聚合物技术形成更小的检测复合物,该复合物具备更好的组织穿透性和灵敏度。此外,与标准 HRP 二抗相比,HRP-聚合物二抗结合了更多的辣根过氧化物酶,从而增加信号强度。


一抗宿主种属

HRP-聚合物二抗

           小鼠

山羊抗小鼠 IgG H&L(HRP 聚合物)                   (ab214879)

            

山羊抗兔 IgG H&L(HRP 聚合物)(ab214880)

           大鼠

山羊抗大鼠 IgG H&L(HRP 聚合物)(ab214882)

           山羊

驴抗山羊 IgG H&L(HRP 聚合物)(ab214881)


更多关于二抗的信息,请查看 此处.


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Alexa Fluor® 为 Life Technologies 注册商标。Alexa Fluor® 染料偶联物包含了 Life Technologies 授权给 Abcam 的技术。


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