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IHC透化

当抗体需要进入细胞内部以检测靶抗原时,需要对其进行透化处理。​

这类抗原包括细胞内蛋白和跨膜蛋白的胞质表位。溶剂或洗涤剂通常用于进行透化处理。

采用甲醛等交联剂固定后,可以使用溶剂进行透化处理。推荐用于细胞骨架、病毒和一些酶抗原。

部分洗涤剂比较刺激,可能会破坏蛋白质(如 Triton™ X-100 或 Np-40),也有部分洗涤剂较温和,无法溶解质膜(如 Tween 20®、皂苷或毛地黄皂苷)。洗涤剂透化处理可显著改善抗体对细胞质中抗原、质膜胞质面抗原和可溶性核抗原的获取。

溶剂和洗涤剂指南


溶剂

备注

溶剂

丙酮

丙酮固定也可进行透化处理


甲醇

甲醇固定可进行透化处理,但有时可能会无效

洗涤剂

Triton™ X-100 或 NP-40

在 PBS 中添加浓度为 0.1% 至 0.2% 的该溶剂,仅需 10 分钟


Tween 20® 皂苷、毛地黄皂苷和 Leucoperm

添加浓度为 0.2% 至 0.5% 的溶剂,10 至 30 分钟

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Tween 20® 是 Croda Americas 的注册商标。Triton 是 Dow Chemical Company 的商标。



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