细胞及生化检测试剂盒FAQ
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一般性问题
在用到酶标仪的检测中，比色检测法与荧光检测法哪个更敏感？
通常荧光检测比比色（分光光度法）检测法约灵敏十倍。在购买荧光检测试剂盒之前，请检查您是否拥有合适的滤光片。
你们提供样品吗？
抱歉，我们不提供测试样品。
应该在什么温度下存放试剂盒？有效期是多久？
储存温度在试剂盒的实验流程中有指明。除非实验流程另有特殊指出，否则通常存放在推荐温度下即可，检测试剂盒一般最多可储存一年。复溶后的组件通常只能储存两到三个月。
能透露你们试剂盒里缓冲液的成分吗？
抱歉，我们不能透露缓冲液的成分或浓度，因为他们属于专利信息。产品说明书中也包含试剂盒部件的SDS（安全数据表），包括任何可能的危害信息。
Abcam是否单独销售试剂盒的组件？可以用其它的缓冲液来制备样本吗？
通常Abcam不单独销售试剂盒的某个组件，但我们会提供一些需求量较大的试剂盒的组件。我们强烈建议您仅使用试剂盒中提供的缓冲液以获得最佳效果，不同试剂盒之间的组件切忌混合使用。若试剂盒未提供裂解缓冲液，请遵循我们的ELISA实验组织和细胞制备及活性测定中建议的方案。
说明书中“test”的定义是什么？
试剂盒是根据整个试剂盒可以承担多少个检测数量来划定规格的。一个“检测”指的单单一个孔的检测反应，并且对照孔和标准品孔都需要考虑在单次实验设计中。样品、对照品或标准品的孔数将因试剂盒而异。
试剂盒适用于哪些物种或样本（细胞、组织、血清、血液、血浆等…）？
对于多个样本的检测有什么建议？
建议在比较或检测多个样本时购买相同批次号的试剂盒，使用每个试剂盒时都需制作一条新的标准曲线，但如果同时订购同一批次的多个试剂盒，而且其中两个试剂盒的标曲相同，则此标曲可用于同一批次的其他试剂盒。
试剂盒在经历了一个周末的货运期后还能使用吗？
建议在收到试剂盒后立即将其储存在我们推荐的温度下。试剂盒在货运条件下经历一个周末后，质量不会受任何影响。
注意事项和使用限制
在使用或处理试剂盒时，我应该采取哪些安全预防措施？
所有试剂都应小心处理并妥善安置。请查阅我们提供的产品安全数据表（SDS）。遵守良好实验室规范（GLP），包括使用手套、穿实验服和佩戴护目镜等，不得在实验室区域内进食、饮水或吸烟。所有生物材料应视为具有潜在危险进行处理，并按照当地既定的安全程序进行安置。
能用Abcam的产品做诊断吗？
不能，我们的产品仅供科研使用。
是否有其他的必需实验材料未被列在试剂盒的使用流程说明中？
我们的试剂盒通常只需要实验室常见的材料或器材，包括：纯水/超纯水或其他类型的双蒸水（ddH2O）、移液器和移液器吸头（包括多通道移液器）、用于制备试剂和缓冲溶液的各种玻璃器皿。
为什么在完成检测后会有一些剩余的试剂？
我们试剂盒中的特定组件会提供多余的量，以应对需要额外稀释液、蒸发或仪器设置的情况。剩余试剂应按当地既定的安全程序进行安置。
如果擅自修改实验方案，或者混合/替代其他批次的试剂盒或供应商的试剂/材料，仍可以获得理想实验结果吗？
对于每个批次的试剂盒产品，我们都按照说明书中提供的方案对每个试剂盒的组件进行了精细的配制和测试。我们十分理解您有时可能需要修改实验方案，或通过添加其他试剂盒的组件来充分利用试剂盒的材料，或者在其他检测试验中使用我们试剂盒的组件。此种情况下，我们不能保证我们产品的有效性。
样本制备
用酶检测法测定代谢物时，应该在试验前脱去蛋白吗？应该用哪种方法？
许多代谢物如NADH、NADPH或ATP的检测可能会受到酶的干扰而被降解。去除样本中的蛋白成分，可去除酶的干扰，提高代谢物的稳定性。
为了快速有效地脱蛋白，我们建议使用Deproteinizing Sample准备试剂盒- TCA (ab204708)。该试剂盒使用三氯乙酸（TCA）来沉淀蛋白质，然后进行中和，以此确保沉淀蛋白质并降低代谢物的损失。
高氯酸（PCA）也常用于样本去蛋白，但它比TCA更具危险性和腐蚀性。若使用PCA的替代方案，请遵循我们的使用PCA脱蛋白方案。
超滤柱也可用作快速去蛋白：可在流穿液中收集到代谢物，而酶/蛋白质在超滤柱的过滤器中被滞留下来。我们推荐10kD超滤柱，如果目标代谢物的分子量足够小，则可以使用更小规格的超滤柱（例如3kD）。但是小规格的超滤柱很难离心并甩干 ，因此会导致代谢物损失。我们建议仅对液体样本使用10kD旋转柱，因为细胞和组织裂解物会有碎片堵塞过滤器。
在进行酶活性和代谢物检测之前，是否可以冻结和储存样本？
为获得最佳结果我们建议尽可能使用新鲜样本，但由于实验条件的限制，可能无法每次都能使用新鲜样本。我们建议先用适当的方法去蛋白（常见于代谢物检测试验），然后在液氮中速冻，并在-80 ℃下储存。样本须尽可能地少经历冻融次数（冷冻前可等分样品，以避免多次冻融），且不得长时间储存，这对于半衰期短的代谢物或在储存后可能失去活性的蛋白水解酶来说是极其重要的。
进行酶活性检测和代谢物检测时应如何处理组织样本？
组织样本应在缓冲液中的完全均质化，同时缓冲液也应置于冰中保持低温，最好使用杜恩斯匀浆器。缓冲液用量需依照实验说明书添加，如未标明，则使用4-6倍于样本体积的缓冲液。谨慎地将匀浆转移到试管中（如果是微型离心机，使用15 mL或50 mL试管，取决于样本的量），在预冷的离心机中低温低速离心3-5分钟。将上清液转移到新的试管中，丢弃不溶颗粒物。详情请参考我们的组织和细胞裂解物制备指南。
如果组织样本未能完全均质化，则可能导致读数不稳定。
应避免在样本制备过程中使用可能干扰检测的物质。比如，EDTA（>0.5mM）、抗坏血酸（>0.2%）、叠氮化钠（>0.2%）、NP-40和吐温-20（>1%）等物质会干扰许多酶相关的实验检测，因此在样本制备过程中应避免使用这类物质。
没有足够多的细胞来满足推荐的起始量，可以减少缓冲液的量吗？
我们已优化了每个实验方案中所需的细胞数量，您可以尝试减量，并按比例减少缓冲液的使用量，但这可能超出试剂盒的检测范围。因此，我们还是建议您遵守实验方案中的样本量。如果真的很难获得足够的细胞，我们建议在不同的时间采集细胞并冷冻储存它们，直到有足够的细胞样本继续进行实验（这种方法不适需在活细胞或固定细胞上进行的实验）。
检测所需的准确的样本量是多少？
由于检测与样本的浓度和性质相关，因此我们无法推荐通用的适用于各种实验的样本量。我们建议您使用梯度稀释液进行预实验，以确定最佳稀释度，从而使读数在标准曲线的线性范围内。
进行试验
-准确遵循实验方案中建议的孵育时间和温度。
-在制备试剂和样本时，尽量避免制备小体积的溶液（＜ 5μL） 如果可以，建议制备一大份混合溶液在同一试验中使用，这可以减少结果的可变性。
-气泡会扭曲读数，所以避免孔内出现气泡，建议在移液时吸头轻轻地在靠在管壁上移液。
读取试验结果
-确保使用正确的波长和过滤设置。
-确保使用正确的板类型：
比色检测法：透明板
试验检测
-样品中的干扰物可能会影响实验结果，请仔细阅读试验方案以识别这些干扰物，并对样本进行去蛋白处理。
-若试验涉及标准曲线，且样本的浓度大于标准品的最大浓度，应稀释样本，使其浓度在标准曲线的线性范围内，以获得准确读数。
实验数据
对于有标准曲线的试验，如何计算实验结果？
您可以在实验操作手册的数据检测板块下找到更多关于如何从标准曲线计算结果的详细信息。如果您需要生成标准曲线或用它来计算每个样本中您的目标代谢物的浓度，请查看我们的网页计算和评估ELISA数据。
为什么我的标准曲线值低于说明书上的值？
影响信号值的因素有很多，如孵育时间、室温、实验操作等。一般来说，要增加标准曲线的信号值，可以延长孵育时间。但只要标准曲线是线性的，您可以放心使用，因为您的样本也将在该标准曲线生成的相同条件下进行测量。
为什么样本标准化很有必要？
当比较两个或多个样本的酶活性或检测抑制剂/激动剂对样本酶活性的影响时，往往需要根据细胞数量或细胞裂解后的蛋白质浓度对样本进行标准化。
使用某样本的预期OD读数是多少？
如果我们知道某样本的预期OD读数，我们会将此信息添加到说明书中。
实验一般需要多长时间？
实验时间因试剂盒、检测物以及测量前样本是否需要额外的纯化步骤而不同。如果我们将实验时间标准化，此信息将呈现在说明书中。但请注意，这个时间只是一个非精确的提示，建议您仔细阅读实验流程然后再做实验计划。
检测实验的灵敏度范围是多少？
每种检测实验灵敏度都不同，这取决于检测的物质和使用的检测方法。如有相应信息我们会添加到说明书中。
酶标仪没有说明书推荐的滤光片，它还能用来试验吗？
说明书上推荐的滤光片可帮助在最佳波长下最大限度地检测到试剂和染料的吸光度和/或荧光发射信号，特别对于样本量很少或酶活性很弱的情况，使用说明书推荐的滤光片非常重要。当然，在最佳波长+/-20 nm范围内的滤光片仍可使用，但如果离峰值越远，信号就会越弱，这种情况将产生较高的背景和噪音。