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我们的流程图使用简便,可帮助您根据需求选择最佳抗体纯化或浓缩试剂盒。
选择与我们的 Lightning-Link®、寡核苷酸和金属偶联试剂盒兼容的试剂盒 | 选择与我们的纳米颗粒偶联试剂盒兼容的试剂盒 |
许多市售抗体和自制抗体通常含有一些可能干扰抗体偶联等应用的物质,这使得纯化成为一个重要的考虑因素。我们的抗体纯化试剂盒适用于血清、组织培养上清液(TCS)和腹水中抗体的纯化。由此得到的纯化抗体与我们的偶联试剂盒完全兼容。
抗体通常储存在含有抗体以外物质的缓冲液中。表 1 中突出显示的抗体纯化试剂盒旨在去除蛋白添加物,使抗体以适合的形式转移到利于偶联的缓冲液中。
表 1.
产品名 | 用途 | 偶联试剂盒兼容性 |
适合多种属 IgG 的纯化 去除包括 BSA、甘氨酸、tris 和叠氮化物在内的污染物 纯化天然样本(如腹水或免疫血清)中的抗体 | Lightning-Link® 偶联试剂盒 寡核苷酸偶联试剂盒 | |
适合多种属 IgG 的纯化 去除包括 BSA、甘氨酸、tris 和叠氮化物在内的污染物 纯化天然样本(如腹水或免疫血清)中的抗体 | Lightning-Link® 偶联试剂盒 寡核苷酸偶联试剂盒 | |
仅适合纯化小鼠 IgG 去除包括 BSA、甘氨酸、tris 和叠氮化物在内的污染物 纯化天然样本(如腹水或免疫血清)中的抗体 | Lightning-Link® 偶联试剂盒 寡核苷酸偶联试剂盒 | |
适合纯化任何抗体亚型和种属 去除 BSA、甘氨酸、tris 和叠氮化物 | Lightning-Link® 偶联试剂盒 寡核苷酸偶联试剂盒 | |
适合多种属 IgG 的纯化 去除包括 BSA、甘氨酸、tris 和叠氮化物在内的污染物 纯化天然样本(如腹水或免疫血清)中的抗体 | 纳米颗粒偶联试剂盒 | |
仅适合纯化小鼠 IgG 去除包括 BSA、甘氨酸、tris 和叠氮化物在内的污染物 纯化天然样本(如腹水或免疫血清)中的抗体 | 纳米颗粒偶联试剂盒 | |
适合纯化任何抗体亚型和种属 去除 BSA、甘氨酸、tris 和叠氮化物 | 纳米颗粒偶联试剂盒 |
对于小鼠抗体纯化试剂盒,这种方法需要在与蛋白 A 或 G 偶联的琼脂糖珠或者具有亲和力和特异性的树脂上捕获抗体。利用磁珠或树脂孵育抗体,然后通过简单的洗涤程序去除不需要的物质。接着洗脱并中和纯化抗体。这种方法不适用于含有大量稀释抗体的样本,例如组织培养上清液。
TCS 含有来自胎牛血清 (FBS) 的牛 IgG 分子,可以补充细胞生长培养基。这些分子会与抗体竞争接受标记,因此,进行偶联反应前,需要去除这些分子。
表 2.
产品名 | 用途 | 偶联试剂盒兼容性 |
适合纯化多种属 IgG,不适合纯化山羊 IgG | Lightning-Link® 偶联试剂盒 寡核苷酸偶联试剂盒 | |
仅适合纯化小鼠 IgG | Lightning-Link® 偶联试剂盒 寡核苷酸偶联试剂盒 | |
仅适合纯化大鼠 IgG | Lightning-Link® 偶联试剂盒 寡核苷酸偶联试剂盒 | |
适合纯化 IgG 片段 | 纳米颗粒偶联试剂盒 |
表 2 列出的纯化试剂盒使用蛋白 A 或对与琼脂糖珠偶联的小鼠或大鼠 IgG 分子具有高亲和力和特异性的树脂。由于树脂与牛 IgG 分子的结合强度很低,树脂可以选择性地捕获抗体,而不会同时纯化牛 IgG。
孵育后,将树脂装入纯化柱,然后通过简单的洗涤程序去除不需要的物质。接着洗脱并中和纯化的抗体。
我们的抗体血清纯化试剂盒(表 3)是通过将高度纯化的蛋白 A 或 G 与琼脂糖珠偶联制备的,可用于从腹水或血清产生的抗体中纯化出多种组分。
表 3.
产品名 | 用途 | 偶联试剂盒兼容性 |
适合纯化血清和腹水中的 IgG 片段 不适合纯化山羊 IgG* | Lightning-Link® 偶联试剂盒 寡核苷酸偶联试剂盒 | |
适合纯化血清和腹水中的 IgG 片段 | Lightning-Link® 偶联试剂盒 寡核苷酸偶联试剂盒 | |
纯化天然样本(如腹水或免疫血清)中的抗体 | 纳米颗粒偶联试剂盒 |
* 请查阅方案手册,了解有关合适和不合适种属抗体的更多信息。
在琼脂糖珠上捕获抗体,并与树脂一起孵育。孵育期结束后,将树脂装入纯化柱,然后通过简单的洗涤程序去除不需要的物质。接着洗脱并中和纯化的抗体。
磁珠抗体纯化系统是基于蛋白 A 的抗体纯化系统,配备独特的洗脱和中和缓冲液,用于浓缩抗体。它还能够纯化少量抗体,回收率高。
抗体与蛋白 A 磁珠结合,随后被磁力架捕获,以纯化抗体。
表 4.
产品名 | 用途 | 偶联试剂盒兼容性 |
抗体浓缩 适合纯化极少量抗体 | 兼容所有偶联试剂盒 |
我们的抗体浓缩和纯化试剂盒(表 5)可以使用离心柱简单快速地浓缩抗体和蛋白。
表 5.
产品名 | 用途** | 偶联试剂盒兼容性 |
适合浓缩抗体和蛋白 去除小分子添加物,例如叠氮化物、甘氨酸和 Tris | Lightning-Link® 偶联试剂盒 寡核苷酸偶联试剂盒 | |
适合浓缩抗体和蛋白 去除小分子添加物,例如盐、柠檬酸盐和叠氮化物 | 金标抗体和磁珠偶联抗体 | |
适合浓缩抗体和蛋白 去除小分子添加物,例如盐、柠檬酸盐和叠氮化物 | Latex 和 Europium 偶联试剂盒 |
** 需要注意的是,在此过程中,任何分子量大于 10 kDa 的缓冲液组分(例如 BSA)都会被浓缩。如果浓缩和重悬后,添加物的浓度不再适合偶联,则应使用合适的纯化试剂盒。
这些试剂盒还可以去除经过滤器过滤的抗体储存液中的任何多余的低分子量添加物,例如 Tris、甘氨酸和叠氮化钠,并捕获抗体,随后可以在有利于偶联的缓冲液中回收抗体。叠氮化钠会迅速降低 HRP 的酶活性,因此抗体与辣根过氧化物酶 (HRP) 偶联时,去除叠氮化钠尤为重要。