IHC和ICC实验中，我该使用哪种封片剂?

在保存和观察被固定和染色的组织和细胞过程中，必须联合使用封片剂与盖玻片。（对于未被固定的活细胞，或换言之，未经多聚甲醛、福尔马林/甲醛和乙醇等固定剂处理的活细胞，细胞周围的培养基通常被称为“成像介质”）

目前存在多种类型的商业封片剂和自制封片剂的配方，选择空间较大。此文介绍了封片剂的选择要点，如有疑问，可以参考商业封片剂的说明书，其中通常会介绍使用建议和使用限制。

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对于免疫组织化学（IHC）和免疫细胞化学（ICC）实验，封片剂的选择在很大程度上取决于显色物质：酶-显色剂和荧光素。

酶-显色剂

酶法检测使用一种酶，如HRP（辣根过氧化物酶）或AP（碱性磷酸酶），与抗体偶联，而后与底物或显色剂联用来完成检测，例如HRP偶联的抗体应用中，一般是过氧化物和DAB（二氨基联苯胺）联用来实现显色。针对酶法检测，选用封片剂时最重要的考虑因素是酶反应的有色产物是否溶于有机溶剂。树脂和非水溶性封片剂（包括甲苯、二甲苯和柠檬烯等）能溶解某些显色剂，导致信号部分或完全丧失。

溶于有机溶剂的显色剂包括：与HRP联用的红色显色剂AEC，与AP联用的固红。当使用这两种显色剂时，请搭配使用水溶性封片剂，并且显色后的切片不要经乙醇和二甲苯脱水处理，直接封片。

DAB不溶于有机溶剂。如果染色后的切片不经脱水处理，可以在DAB染色后使用水溶性封片剂来封片，但大多数选用DAB的实验更倾向于使用经乙醇和二甲苯（或二甲苯替代品）脱水处理的切片，并选用诸如树脂这类非水溶性封片剂来封片。非水溶性封片剂干燥速度快，通常比水溶性封片剂更容易处理。

荧光染色

荧光染色实验建议选用水溶性封片剂。大多数用于组织切片免疫荧光和细胞免疫荧光实验的水溶性封片剂都包含防淬灭剂，其在观察染色结果时，可以减弱荧光素的淬灭。

一些专用于免疫荧光染色实验的封片剂会含有某种荧光核染料，如DAPI和碘化丙啶。这类产品使用上很方便，但并非必要，因为细胞核也可以在封片之前被荧光核染料染色。

其他考虑因素

硬化型和非硬化型

水溶性封片剂大致分为两种：硬化型和非硬化型。对于需要长期保存的经非硬化型封片剂封片的样品，盖玻片的边缘需要密封处理，可以用指甲油进行密封。如果没有密封剂，切片上会形成气泡，封片剂也会在蒸发时从边缘处开始皱缩。

相较而言硬化型水溶性介质更为方便，但如果切片厚度超过10微米，或者随着时间的推移封片剂会发生皱缩，则仍需要将盖玻片四周密封处理。

有报道指出一些指甲油会致使GFP（绿色荧光蛋白）荧光淬灭。对于含有GFP的样本，建议考虑VALAP，这是一种凡士林、羊毛脂和石蜡的混合物（配方可以在网上找到）。

折射率

封片剂的折射率应与样品和盖玻片的折射率相当，以尽量减少光学像差。商业封片剂的设计通常会考虑到这一点。