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在血管生成和内皮细胞生长中具有生长因子活性。
诱导内皮细胞增殖,促进细胞迁移,抑制细胞凋亡并诱导血管透化。
与FLT1 / VEGFR1和KDR / VEGFR2受体,硫酸乙酰肝素和肝素结合。
VEGFA存在多个异构体,如VEGF-206,VEGF-165,VEGF-145等。
NRP1 / Neuropilin-1结合异构体VEGF-165和VEGF-145。
异构体VEGF165B与KDR结合,但不激活下游信号通路,不激活血管生成并抑制肿瘤生长。
异构体VEGF189、VEGF165和VEGF121广泛表达。
异构体VEGF206和VEGF145表达不广泛。
与垂体相比,在垂体肿瘤中的表达水平更高。
VEGFA的表达在胚胎发生过程中上调,随后下调,但在生理性和病理性血管生成中VEGFA的表达再次上调。
VEGFA属于分泌型蛋白。
异构体L-VEGF189定位于内质网、高尔基体,也可分泌,定位于细胞外空间,细胞外基质。
N-VEGF定位于细胞质和细胞核。
异构体VEGF121、异构体VEGF165和异构体VEGF189是分泌型。
图二:VEGFA ICC实验结果图,Anti-VEGFA抗体[EP1176Y] (ab52917)。绿色:VEGFA,红色:Tubulin,蓝色:DAPI。 |
人(P15692):异构体 1(VEGF206), 2(VEGF189), 3(VEGF183),4(VEGF165),5(VEGF148),6(VEGF145),8(VEGF165B),9(VEGF121),10(VEGF111),L11(VEGF165),L12(VEGF121),L13(VEGF189),L14(VEGF206),15-18: 16-45kD (预测)
小鼠 (Q00731): 异构体 1-6:14-40kD (预测)
大鼠 (P16612):异构体 1-4: 17-25kD (预测)
存在N-糖基化修饰
图三:WB-Anti-VEGFA 抗体[EPR20705] (ab214424)。样品:泳道1:20 µg人胎儿血管裂解液泳道2:20 µg HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞系)全细胞裂解液泳道3:20 µg HUVEC(人脐静脉内皮细胞系)全细胞裂解液泳道4:20 µg SH-SY5Y(人骨髓神经母细胞瘤细胞系)全细胞裂解液泳道5:20 µg neuro2a(小鼠神经母细胞瘤细胞系)全细胞裂解液泳道6:20 µg bEND.3 (小鼠脑内皮瘤细胞系)全细胞裂解液泳道7:20 µg C6(大鼠胶质肿瘤细胞系)全细胞裂解液泳道8:20 µg RAW 264.7 (Abelson小鼠白血病病毒转化小鼠巨噬细胞系)全细胞裂解液一抗:Anti-VEGFA 抗体[EPR20705] (ab214424) ,浓度 1/1000 稀释。二抗:使用HRP标记山羊抗兔二抗(ab97051),浓度1/100000稀释。预测条带大小:27 kDa检测条带大小:40 kDa曝光时间:3分钟(泳道1-4,7,8);41秒(泳道5);15秒(泳道6) |
在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点:
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人肾组织
图四:IHC - Anti-VEGFA 抗体 [EP1176Y] - C-terminal (ab52917)样品名称:福尔马林/PFA固定的人肾组织石蜡切片一抗:使用Anti-VEGFA 抗体 [EP1176Y] - C-terminal (ab52917),浓度 1/100 稀释(2.96 µg/ml)。二抗:使用HRP标记的山羊抗兔二抗。抗原修复方法:使用pH 6.0柠檬酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复。 |