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骨钙素,又称含骨γ-羧基谷氨酸蛋白(BGLAP),属于骨钙素/基质Gla蛋白家族。
骨钙素占总骨蛋白的1-2%,并与磷灰石和钙强烈结合。
骨钙素仅由成骨细胞分泌,但对骨矿化和骨密度的影响很小。
骨钙素以内分泌方式在多种生理过程中发挥关键作用,例如葡萄糖稳态和运动能力、大脑发育、认知和男性生育能力。
骨钙素通常用作骨形成过程的标志物。
分泌型蛋白
图二:Osteocalcin靶点IHC-P实验结果图,Anti-Osteocalcin antibody (ab198228)。 |
人 (P02818): 11 kDa (预测)
小鼠 (P86546): 11 kDa (预测)
大鼠 (P04640): 11 kDa (预测)
γ-羧基谷氨酸残基由维生素 K 依赖性羧化形成
骨钙素是一个11kDa左右的小分子量蛋白,在WB实验中使用15%或更高浓度的SDS-PAGE,也可以使用梯度胶以获得理想实验结果。
建议在WB实验转膜液中加入20%甲醇。
重组人Osteocalcin蛋白(ab152231, ab152232)
Hela细胞裂解液
图三:WB-Anti-Osteocalcin antibody [EPR3690] (ab133612)。一抗:使用ab133612,浓度1/1000 (未纯化)。泳道1:0.01µg Osteocalcin重组蛋白预测条带大小:11 kDa |
关键控制点在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点: 样本制备 添加足够量的蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。 整个样本制备过程中,保持样本置于冰上。 通过Bradford分析、Lowry分析或BCA分析测定样本总蛋白浓度。 转膜 强烈建议转膜完成后使用丽春红染色,确定转膜是否成功。 抗体孵育 建议使用新鲜抗体,避免重复利用。 |