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可能在促进内质网上的多聚蛋白复合物的组装中起作用。
通过与DNAJC10的相互作用,参与蛋白质的正确折叠,同时,可能是为了促进DNAJC10从底物中释放出来, 还会参与错误折叠蛋白的降解过程。
类风湿性关节炎的自身抗原。
GRP78 BiP定位于细胞质,内质网腔,黑素体,细胞表面。
图二:GRP78 BiP ICC实验结果图,Anti- GRP78 BiP 抗体 [EPR21226] (ab213258)。HeLa细胞用5ug/ml Brefeldin A处理细胞30 min。绿色:GRP78 BiP,红色:Tubulin,蓝色:DAPI。 |
人(P11021):72kDa(预测)
小鼠(P20029):72kDa(预测)
大鼠(P06761):72kDa(预测)
存在乙酰化,磷酸化修饰等
GRP78 BiP蛋白在不同细胞系和组织之间的表达量存在差异;使用Tunicamycin处理会提高部分细胞中检测到的蛋白信号强度,如HeLa, MCF, MEF, HUVEC, Raw 264.7等。所以,建议内源表达较低的细胞样本尝试使用Tunicamycin处理。
细胞系:HeLa、 HepG2细胞裂解液。
组织:小鼠、大鼠肝脏裂解液。
图三:WB-Anti-GRP78 BiP 抗体[EPR4041(2)] (ab108615)。泳道1:15 µg HeLa全细胞裂解液泳道2:15 µg 10µg/ml衣霉素处理12h 的HeLa全细胞裂解液泳道3:15 µg MCF-7全细胞裂解液泳道4:15 µg 10µg/ml衣霉素处理48h 的MCF-7全细胞裂解液泳道5:15 µg MEF全细胞裂解液泳道6:15 µg 10µg/ml衣霉素处理48h 的MEF全细胞裂解液一抗:Anti-GRP78 BiP 抗体[EPR4041(2)] (ab108615),浓度 1/1000 稀释。二抗:HRP标记的山羊抗兔二抗(ab97051),浓度 1/20000 稀释。预测条带大小:72 kDa |
在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点: 样本制备 添加复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。 整个样本制备过程中,保持样本置于冰上。 通过Bradford分析、Lowry分析或BCA分析测定样本总蛋白浓度。 电泳 建议使用阳性对照。 转膜 建议转膜完成后使用丽春红染色,确定转膜是否成功。 抗体孵育 请根据产品说明书选择合适的抗体工作浓度。 |