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GSDME是一种能将非炎症性凋亡转化为焦亡的孔形成蛋白的前体。GSDME构成了成孔蛋白的前体:裂解后,释放的N端部分(Gasdermin-E,N端)移动到质膜,与膜结合形成内径10-15纳米(nm)的孔,引发焦亡。
GSDME全长蛋白在切割前是没有活性的,无激活信号时,N端和C端结构域的分子间相互作用能够介导自抑制调控。
通过CASP3或颗粒酶B(GZMB)裂解后释放的N端部分(Gasdermin-E,N端)携带固有的焦解诱导活性,分别将非炎症性凋亡转化为焦亡或促进颗粒酶介导的焦亡。
耳蜗表达。
心、脑、胎盘、肺、肝、骨骼肌、肾、胰腺表达量低,胎盘表达量最高。
GSDME,全长:细胞质,细胞膜
GSDME,N端:细胞膜
图二:DFNA5/GSDME靶点IHC实验结果图,Anti-DFNA5/GSDME产品(ab230482)。 |
人(O60443):异构体1:54.5 kDa(预测);异构体2:10.9 kDa(预测);
异构体3:36 kDa(预测);
小鼠(Q9Z2D3):56.6 kDa(预测)
大鼠(F1MAG0):56.8 kDa(预测)
caspase-3可以将全长GSDME,剪切成有活性的N端(包含1-270aa片段的GSDME-N)和C端(GSDME-C)。如果需检测到N端或者C端的GSDME片段,细胞通常需要诱导处理。
GSDME表达水平因样品类型(组织和细胞)而异,可能仅在部分组织和细胞株系表达,其表达水平也存在差异,因此需要对样品处理和WB实验进行一些优化。建议设置阳性和阴性对照。
组织成分更复杂,在WB实验时可能出现多条条带现象。
小鼠大脑组织裂解液
SH-SY5Y全细胞裂解液
HEK-293全细胞裂解液
SW480全细胞裂解液
图三:WB-Anti-DFNA5/GSDME antibody [EPR19859] - N-terminal产品(ab215191)。一抗:使用Anti-DFNA5/GSDME antibody [EPR19859] - N-terminal (ab215191)一抗,浓度0.7 µg/ml稀释。泳道1:小鼠大脑组织裂解液;泳道2:小鼠肾脏组织裂解液;泳道3:小鼠肝脏组织裂解液;泳道4:小鼠胸腺组织裂解液;预测条带大小:55 kDa检测条带大小:55 kDa | |
图四:WB- Anti-cleaved N-terminal DFNA5 / GSDME antibody [EPR20867-248] (ab222408)。泳道1:60uM etoposide处理14小时,Wild-type SH-SY5Y全细胞裂解液。泳道2:未处理的SH-SY5Y全细胞裂解液。泳道3: 60uM etoposide处理14小时,敲除DFNA5/GSDME 的 SH-SY5Y全细胞裂解液二抗:Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP) (ab97051),1/20000 稀释Blocking和dilution buffer:5% NFDM/TBST(脱脂奶粉)预测条带大小:55 kDa检测条带大小:35 kDa | |
图五:WB-Anti-DFNA5/GSDME antibody [EPR19859-60] - C-terminal (ab221843)泳道1:用DDDDK tag空载转染HEK-293,全细胞裂解液。泳道2:用DDDDK tag标记的DFNA5/GSDME (N-terminus)蛋白载体转染HEK-293,全细胞裂解液。泳道3:用myc 标记的DFNA5/GSDME (C-terminus)蛋白载体转染HEK-293,全细胞裂解液。预测条带大小:54 kDa |