流式细胞术培训第 4 周:疑难解答

欢迎来到我们的流式细胞术系列培训。我们首先介绍一些基本知识,比如了解您的细胞仪,接着介绍一些细节,最后介绍如何通过这项强大的技术获得最佳结果。

欢迎来到流式细胞术培训的最后一周。在这里,我们将提供一些最佳的疑难解答方案,以解决您在实验室中可能遇到的诸多问题。

概述

4.1 疑难解答视频 - 无信号/高背景

4.2 补偿、光谱重叠和溢出计算

4.3 解决遇到的其他问题

4.4 常见问题解答


4.1 疑难解答视频-无信号/高背景

遇到的主要问题是无信号或高背景。下面的短视频将解释如何解决这些问题。


4.2 补偿、光谱重叠和溢出计算

在本视频中,我们将讨论如何进行补偿,特别是如何计算溢出的光谱重叠,以及补偿与稳定性的关系。​​

​​

4.3 解决遇到的其他问题

我们已经讨论了如果您遇到任何无信号或高背景问题时该怎么办,但是,您可能还会遇到其他问题,例如:

  • 无信号/荧光强度弱
  • 荧光强度强
  • 高背景/阳性细胞百分比高
  • 在应该只有一个细胞群的情况下观察到两个或多个细胞群
  • 侧向散射背景高(来自小颗粒)
  • 低事件率
  • 高事件率

​​查看完整的疑难解答指南,了解如何解决这些问题。

4.4. 流式细胞术常见问题解答

​​样本需要固定吗?染色前固定还是染色后固定?

任何含有潜在生物危害物质的样本都应该固定。我们建议在染色完成后向样本中加入 1 至 2% 的多聚甲醛。然后将样本置于 4°C 下避光保存并在 24 小时内对样本进行分析。

对于细胞内染色,在该过程中同时固定和透化细胞。请参阅我们的细胞内染色指南

细胞需要透化吗?

我们建议您查看数据表,以获取更多详细信息。如果您检测的靶蛋白是膜蛋白,那么很可能不需要透化步骤。在极少数情况下,抗体表位可能位于膜蛋白的胞浆区。在这种情况下,您可能需要温和的渗透剂进行透化,如皂苷。检查数据表中的数据(缩略语和其他图像),看看其他研究人员是否需要透化步骤。所有细胞质和细胞核靶蛋白都需要进行细胞透化,以供抗体检测。您可以查看我们的细胞内染色指南。​​


总结

我们为期4周的流式细胞术系列培训到此结束。希望您不仅能够设计和运行流式细胞术实验,而且还能在出现问题时解决问题。请务必将此信息保存在安全的地方以备将来参考。此外,请密切关注我们的主培训页面,以防您需要复习或掌握实验室中的其他常见应用。

​​





注册