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以下是关于流式细胞术样本制备的一些重要提示,这些提示可能会帮助您
您可以添加最多 5 mM EDTA,以进一步防止细胞粘附。在此情况下,您应该使用 BSA(0.1-1%)或经透析的 FBS(1-5%),因为未透析的 FBS 会取代 Ca/Mg2+。
合适的对照可以帮助您区分真假结果并识别方法中的潜在问题。因此,您需要花时间正确设置对照,这一点至关重要。
确保您在以下几个方面设置了对照:
由于非特异性结合和自发荧光水平增加,死细胞可能产生假信号,导致错误的结论。
天然存在的细胞组分如 NADPH 核黄素可发出掩盖抗原特异性信号的荧光。
可以在不同的通道中检测到一个荧光团发射出的荧光。这种现象会严重影响给定通道的测量结果。
当抗体与脱靶表位或 Fc 受体结合(但不作为受体-配体相互作用)或通过其偶联的荧光团与表位或 抗原结合时,会发生这种情况。
直接和间接实质上是指检测分子的位置,如荧光团。对于直接流式细胞术,荧光团直接与一抗偶联。在间接流式细胞术中,荧光团与结合一抗的二抗偶联 - 这样可以通过额外的方案步骤来扩增信号。
总结
第 2 周的培训已经结束,希望您会对以下内容有更多了解:
如何使用流式细胞术来观察细胞内蛋白
第 3 周,我们将进一步讨论补偿和数据分析。