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了解您在 ELISA 实验中所需的对照品。
适当的对照品可以帮助您准确区分真阳性结果和潜在的假阳性结果。当您需要对实验方案进行疑难解析时,阳性和阴性对照也十分重要。在此,我们将为您解释ELISA实验中使用各种对照的必要性。
可使用已知含有目标蛋白的内源性可溶样品,或已知含有检测抗体免疫原的纯化蛋白或多肽来作为阳性对照。当样品的检测结果为阴性时,阳性对照的阳性结果可表明实验过程无误且有效,所以实验的阴性结果是真实的。
我们建议阅读抗体的产品说明书,通常其中会有适合的阳性对照推荐。如果没有对照推荐,我们建议如下:
打开说明书上的 Swiss-Prot 或 Omnigene 数据库链接。这些数据库通常会有蛋白表达水平的组织列表。高表达的组织也可被视为阳性对照。
在 GeneCards 中搜索目标蛋白。这里通常会为您提供各种组织中目标蛋白的表达水平。
如果您仍然难以找到合适的对照,我们建议在 PubMed 上进行一次快速的文献检索,查看哪些组织和细胞表达目标蛋白。
阴性对照指的是已知不表达目标蛋白的样品。其有助于检测非特异性结合和假阳性结果。为验证结果,您使用的每个微孔板均应包含一份阴性对照样品。
标准品是一种含有已知浓度的目标蛋白的样品,可从中获得标准曲线。例如,以下是我们的小鼠 IL6 ELISA 试剂盒的典型标准曲线,浓度范围为 15.6 至 500 pg/mL。标准曲线不佳意味着抗体未正确结合或未捕获蛋白标准品。趋势线的 R2 值应 > 0.99。