ELISA 所需的对照样品

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​​阳性对照​

可使用已知含有目标蛋白的内源性可溶样品，或已知含有检测抗体免疫原的纯化蛋白或多肽来作为阳性对照。当样品的检测结果为阴性时，阳性对照的阳性结果可表明实验过程无误且有效，所以实验的阴性结果是真实的。

我们建议阅读抗体的产品说明书，通常其中会有适合的阳性对照推荐。如果没有对照推荐，我们建议如下：

•  检查抗体是否存在任何 Abreviews^®。成功实验结果中所使用的任何组织、细胞或裂解物均可被视为适合的阳性对照。

• 打开说明书上的 Swiss-Prot  或 Omnigene 数据库链接。这些数据库通常会有蛋白表达水平的组织列表。高表达的组织也可被视为阳性对照。

• 在 GeneCards 中搜索目标蛋白。这里通常会为您提供各种组织中目标蛋白的表达水平。

• 如果您仍然难以找到合适的对照，我们建议在 PubMed 上进行一次快速的文献检索，查看哪些组织和细胞表达目标蛋白。

阴性对照

阴性对照指的是已知不表达目标蛋白的样品。其有助于检测非特异性结合和假阳性结果。为验证结果，您使用的每个微孔板均应包含一份阴性对照样品。

标准品

标准品是一种含有已知浓度的目标蛋白的样品，可从中获得标准曲线。例如，以下是我们的小鼠 IL6 ELISA 试剂盒的典型标准曲线，浓度范围为 15.6 至 500 pg/mL。标准曲线不佳意味着抗体未正确结合或未捕获蛋白标准品。趋势线的 R² 值应 > 0.99。

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样本基质（加标对照品）对照中的标准品

在 ELISA 中检测血清样品时，按照惯例标准品用正常稀释缓冲液来稀释。但我们建议您同时用检测的种属血清来稀释标准品。然后可以将两者进行比较，以确保血清中的其他蛋白质对标准曲线没有影响。这就是所谓的加标对照，并可表明目标蛋白在加入基质后的回收率。可接受的结果为 80%-120%。

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内源性阳性对照

如果您正在检测重组蛋白样品，我们建议您纳入内源性阳性对照。这应该是您实验的一个必要部分。

重组蛋白的抗体检测存在一些固有的困难，需要考虑到重组蛋白的折叠可能与内源性天然蛋白的结构不同，并可能阻止抗体结合表位。标签蛋白的情况尤其如此，所以建议确保标签位于重组蛋白的N端或C端。

最重要的是，务必确保重组蛋白中包括您所使用的抗体的免疫原序列。内源性阳性对照对验证实验结果，以及说明试剂（例如抗体）和实验过程的有效性，起到重要作用。

ELISA 指南

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