抗体基础第 2 周:储存和处理

​​欢迎来到我们关于如何正确选择和使用抗体的系列培训。在这里,我们将教会您选择最符合您需求的抗体,如何在使用前正确处理和保存抗体,以及如何解决疑难。 

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第 2 周:储存和处理您的抗体

​用适当的储存和处理方式,大多数抗体应该能在数月甚至数年内保持活性。只要简单的几步,您就可以使您的抗体能在更长时间内保持预期的活性。

请记住一定要参考制造商的数据表以获得具体的储存建议。


概述

2.1 处理
2.2 储存
2.3 常见问题



2.1 处理新抗体



​​离心

第一件事是: 当您拿到抗体时要将其离心,因为在运输过程中,它会比平时更“活跃”,因此在盖子中会有液体。快速的一阵离心可以确保您所有珍贵的抗体都集中在管底,完全可以方便吸取。把抗体放在4 ℃,直到您有机会将它们分装 — 如果有必要的话,您可以将抗体放在4 ℃长达两周,但您应该尽快将其分装。

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分装

您肯定不想在使用时频繁地将整管抗体从冰箱中拿进拿出,所以将整管抗体分装成10 µL或大于10 µL的小管会是个好主意。(分装量越少,储液浓度就更易受蒸发和抗体吸附在管子表面的影响,因此分装时最少要10 µL的量。)这样的话在任何时候您只需拿出您所需要的量的抗体。

为了防止微生物污染,在抗体制备时可以添加叠氮化钠,使其最终浓度为0.02% (w/v)。需要指出的是,如果用抗体染色或处理活细胞,或者用抗体进行体内研究,不要使用叠氮化钠。因为这种抗菌剂对大多数其他生物都是有毒的,而且它能阻断细胞色素电子传递系统。

去除叠氮化钠的实验方案

了解何时需要将叠氮化钠从抗体溶液中去除以及如何实现。

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​​储存

储存时反复冻融会使抗体变性,导致其形成聚合物,进而降低其与抗原的结合能力。正因为如此,确保分装的小管只经历单次冻融。您应该将您的抗体储存在-20℃,因为储存在-80℃并没有显著的优势。噢,还因为您的实验室可能也没有一个无霜冰箱。不太可能您的实验室会有,但是反复冻融是应该可以避免的。出于同样的原因,抗体管应该放置在冰箱中温度波动最小的区域,例如冰箱的背部,而不是放在冰箱的门架上。

>>> 点击这里,获得更详细的储存信息


2.2 储存偶联抗体


偶联抗体通常需要更多一点的关照,因为它们比普通的非偶联抗体要复杂一些。这里有一些关于正确储存和处理偶联抗体的提示。



荧光标签

e.g Alexa Fluor®, Dylight® , FITC, PE


HRP

处理

  • 收到后分装
  • 避免反复冻融
  • 避光储存
  • 收到后分装
  • 避免反复冻融
  • 避光储存

分装

  • 分装时远离直接光源
  • 当您收到抗体时,以10,000 x g离心20秒
  • 在轻轻吹打3 - 4次混匀后分装。不要颠倒混匀,因为这可能会导致溶液产生泡沫
  • 分装时远离直接光源
  • 当您收到抗体时,以10,000 x g离心20秒
  • 不要往HRP 偶联抗体中添加叠氮化钠,因为该防腐剂会抑制HRP活性

长期储存

  • -20℃储存
  • 储存在琥珀色小管中或覆盖有铝箔的管子中
  • -20℃储存
  • 储存在琥珀色小管中或覆盖有铝箔的管子中

短期储存

  • +4℃ 短期储存  (1–2 周)
  • +4℃ 短期储存  (1–2 周)


>>> 了解不同抗体偶联物之间的差异


2.3 储存和处理的常见问题


当谈到如何最好地储存和处理抗体时,我们会遇到很多相同的问题。以下是前五大问题的回答:

Part 2 - Storage and Handling FAQs

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>>>  获取我们针对干冰常见问题的答案


总结

如果您错过了什么,这里有一个快速的纲要

  •  将您的新抗体用10000 x g离心20秒,以使所有液体被离心下来
  •  您可以在4℃ 短期储存抗体
  •  分装量 ≥ 10 µL
  • 分装的小管仅冻融一次
  •  必要时加入叠氮化钠
  •  -20℃可以长期储存抗体
  •  不要使用无霜冰箱!
  •  您可以将抗体保存在-80℃,但真的没有必要,除非供应商特别指出


以上就是第 2 周的全部内容!

下周,我们将重点关注如何充分利用抗体。

您将会学到:

  • 抗体验证
  • 选择对照
  • 优化您的实验
  • 有用的分步实验方案​

回顾

如果您错过或想重温第一部分,您可以在这里找到:

第 1 周:选择正确的抗体

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