抗体保存指南
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各类抗体保存指南，避免污染或损失。
2022 年 9 月 22 日更新
如果保存得当，大多数抗体的活性均可保持数月甚至数年。我们在此提供了关于抗体保存和处理的通用指南。至于具体保存建议，请务必参考制造商的官网说明书。
通用保存指南
收到抗体后，您需要以 10,000 x g 的离心力离心 20 秒，排出卡在小瓶螺纹里的溶液，然后分装至低蛋白结合微量离心管中。分装可以最大限度地减少因反复冻融导致的损失，因为反复冻融会使抗体变性，导致抗体形成聚合物，从而降低抗体的结合能力。分装还可以最大限度地减少因多次从一个小瓶中移液引发的污染。
分装抗体应冻融一次，如有剩余，在 4°C 下保存。通常建议在 -20°C 下保存抗体，因为在 -80°C 下保存抗体的优势并不明显。但是，由于抗体存在形式差异，保存温度可能有所不同，因此请务必查看官网说明书，获取具体的温度建议。例如，我们的 不含 BSA 和叠氮化物的抗体 应在 4°C 下保存，不应冷冻。
分装量的多少取决于您每次实验的常规用量。分装量不得少于 10 μL。分装量越少，储备液浓度就越容易受到蒸发以及抗体吸附在存放瓶表面的影响。
大多数情况下，收到抗体后，可在 4°C 下保存一至两周。因此，遵循官网说明书上的建议至关重要。
避免冻融损失
避免使用无霜冰箱：虽然您的实验室不太可能会反复冻融，但还是提醒您避免反复冻融。因此，抗体瓶应放置于冰箱中温度变化最小的区域，例如冰箱后壁处，而非冰箱门处。
一些研究人员为了防止反复冻融造成的损失，会在抗体中添加冷冻保护剂甘油至抗体终浓度为 50%，因为甘油可以将冰点降低至 -20°C 以下。虽然对许多抗体来说，这种做法是可行的，但您仍应查阅官网说明书，以确定制造商是否对抗体在这种保存条件下的稳定性进行了测试。
由于 -80°C 低于甘油的冰点，所以不建议在 -80°C 下保存添加甘油的溶液。此外，甘油或其他冷冻保护剂可能会被细菌污染，因此，您必须获得无菌溶液。
偶联抗体的保存
由于偶联抗体比未偶联抗体更加复杂，所以保存和操作偶联抗体期间需要注意的事项更多。例如，偶联抗体，无论是荧光染料偶联抗体、酶偶联抗体还是生物素偶联抗体，当暴露于光照时都会影响偶联抗体的活性，所以需要保存在深色瓶内，或者包裹上铝箔。荧光偶联抗体特别容易受到光淬灭的影响，因此在整个实验过程中均应避光操作。
下表提供了妥善保存和处理偶联抗体的详细指南。
荧光标记物，如 Alexa Fluor®、Dylight®、FITC、PE | 酶偶联抗体，如 HRP | |
处理 | 收到产品后立即分装 避免反复冻融 存放在深色或防紫外线的容器中 | |
分装 | 分装时避免光线直射 收到抗体后，以 10,000 x g 的离心力离心 20 秒 | |
分装前用移液枪轻柔混匀。重复 3 - 4 次。请勿翻转混合，避免溶液起泡 | 请勿在 HRP 偶联抗体中加入叠氮化钠，因为这种保护剂会抑制 HRP 的活性 | |
长期存放 | 遵循制造商官网说明书上的建议 如果含有冷冻保护剂（例如甘油）*，则在 -20°C 下保存 保存在深色小瓶或用锡箔纸包裹的试管内 | |
短期保存 | +4°C 下短期保存（1 - 2 周） | |
* 冻融酶偶联抗体不仅会降低酶的活性，还会影响抗体结合能力。因此，除非抗体含有冷冻保护剂并且其长期保存在 -20°C 下的稳定性已经过验证，否则不应冻存酶偶联抗体，而应将其保存在 4°C 下。
使用叠氮化钠防止污染
为防止微生物污染，您可以在抗体溶液中添加叠氮化钠，至终浓度为 0.02%（质量浓度）。如果抗体已经包含该保护剂，将在官网说明书的储存缓冲液部分指明。
什么时候不能使用叠氮化纳
利用抗体染色或处理活细胞时，或者开展 in vivo 研究时，应避免使用叠氮化钠。这种抗菌剂会阻断细胞色素的电子传递系统，因此对大部分生物体都有毒性。
叠氮化钠会干扰胺基的偶联，因此应在偶联之前需将其去除。偶联后，您可以将抗体存放在叠氮化钠中，但 HRP 偶联抗体除外，因为叠氮化钠会抑制 HRP。 叠氮化钠可以用 0.01% 的硫柳汞（merthiolate）代替，后者不含伯胺。此外，还可以使用透析、超滤或凝胶过滤法去除抗体溶液中的叠氮化钠。
蛋白质的浓度和稳定性
通常来说，蛋白质在较高浓度下保存时不易发生降解，理想浓度为 ≥1 mg/mL。因此，稀释至工作浓度的抗体在 4°C 下保存时，最好不要超过一天时间。
如果抗体浓度很低，可以在抗体溶液中添加蛋白稳定剂，如 BSA。蛋白稳定剂可吸附于管壁，将抗体损失降至最低。但是，由于蛋白稳定剂会与抗体竞争，降低结合效率，所以请勿在您打算偶联的抗体中添加蛋白稳定剂。
Alexa Fluor® 是 Life Technologies 的注册商标。Alexa Fluor® 染料偶联物包含由 Life Technologies 授权给 Abcam 的技术。
DyLight® 是 Thermo Fisher Scientific Inc. 及其子公司的注册商标。
其他有用的资源
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