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免疫球蛋白 F(ab) 和 F(ab')2 片段的优势

免疫球蛋白片段的使用可以消除抗体的 Fc 部分与细胞上的 Fc 受体之间的非特异性结合。

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关于片段抗原结合的描述

​​F(ab) 片段是仍可与抗原结合的抗体结构,但为单价并且不含 Fc 部分。木瓜蛋白酶消化抗体后得到两个 F(ab) 片段以及一个 Fc 片段,每个F(ab)片段均为约 50 kDa。

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相反,F(ab')2 片段抗体是由胃蛋白酶消化整个 IgG 抗体(见下文的 IgG 结构),去除大部分 Fc 区同时完整保留一些铰链区后得到的。F(ab')2 片段具有通过二硫键连接在一起的两个抗原结合 F(ab) 部分,因此 F(ab')2 片段为双价抗体,分子量为约 110 kDa。

​​附图说明:轻链 (LH) 折叠成可变区 (VL) 和恒定区 (CL),而重链由一个可变区 (VH) 和三个恒定区(IgG 和 IgA)或四个恒定区 (IgE) 组成。


使用片段二抗的优势

  1. F(ab) 和 F(ab')2 片段抗体消除了抗体 Fc 部分与细胞(如,巨噬细胞、树突细胞、中性粒细胞、NK 细胞 和 B 细胞)上的 Fc 受体之间的非特异性结合。
  2. 由于体积较小,片段抗体可更有效地渗入组织。
  3. 由于片段抗体不具有 Fc 部分,因此不干扰抗 Fc 介导的抗体检测。


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选择 F(ab) 片段

  • 单价抗体片段(F(ab) 片段)对于封闭因一抗结合和双重染色实验造成的背景而言是一种强效工具。
  • F(ab) 片段用于封闭细胞、组织上的内源性免疫球蛋白,在使用来自同一物种的一抗进行的多重标记实验中也用来封闭暴露的免疫球蛋白。
  • 在 IHC 中,用普通血清封闭步骤后,我们建议用过量的 F(ab) 片段孵育,以封闭内源性免疫球蛋白。在 WB 和 ELISA 中,不建议将这些抗体用于封闭免疫球蛋白。

选择 F(ab')2 片段

  • 二价抗体片段(F(ab')2 片段)比整个 IgG 分子小,使其能够更好地渗入组织,因而有利于在 IHC 中更好地识别抗原。使用 F(ab')2 片段还避免了与活细胞上的 Fc 受体或蛋白 A/G 的非特异性结合。
  • 不建议将 F(ab')2 片段用于封闭,因为它们有两个结合位点,可能捕获随后引入的一抗。但与 F(ab) 片段相反,正是由于 F(ab')2 片段有两个结合位点,它们可以同时结合和沉淀抗原。为了避免与 Fc 受体结合,我们建议同时使用普通血清和这些抗体。

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