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切片前在冰上冷却石蜡包埋的组织块。冷蜡可为组织标本内较硬的成分提供支撑,以此获得较薄的切片。从融冰中渗入组织块的少量水分也会使组织更容易切割。
在水浴槽中注入超纯水,加热至 40℃ 至 45℃。
将刀片放入固定卡槽中,确保其被牢固固定,并设置间隙角。间隙角防止刀片面与石蜡块表面接触。按照切片机生产商的说明书设置间隙角。对于 Leica 刀片,角度通常介于 1° 和 5° 之间(图 1)。
插入石蜡块并定位,以便切片时刀片可以垂直穿过组织块。
小心地用刀片接近组织块并切几个薄片,以确保定位正确。必要时进行调整。
修剪蜡块,暴露组织表面,以获取有代表性的组织切片表面。修剪通常在 10 至 30 μm 的厚度范围内进行。
切片厚度大约为 4 至 5 μm(您可能需要丢弃前几个切片,因为其可能含有因修剪而造成的孔洞)。
用镊子拾起连续切片,使其浮在水浴槽的水面上,并展平。用镊子分离切片。
用显微镜载玻片从水浴槽中捞出切片,并将其直立存放在玻片架中。
将玻片架放入烘箱中,使切片在 37℃ 下干燥过夜。