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使用小鼠单克隆抗体对小鼠组织进行染色时去除背景着色的技巧。
使用小鼠抗体染色小鼠组织是一个复杂的过程,因为经常观察到高水平的背景着色。消除该背景非常困难。
大部分背景是由与被染色组织中的内源性小鼠 IgG 结合的二抗以及与 B 细胞、浆细胞和巨噬细胞上的 Fc 受体结合的二抗引起的。
Abcam提供了强大的一步法试剂盒,可以在小鼠组织上使用小鼠抗体。 ab269452 - 小鼠抗小鼠聚合物 IHC 试剂盒 是一种基于聚合物的系统,具有更高的灵敏度,可节省时间且检测简便。
或者,如果您选择不使用小鼠抗小鼠聚合物 IHC 试剂盒,下文提供几条尝试减少背景的技巧。
封闭内源性 IgG
Fc 受体存在于巨噬细胞和单核细胞等几种细胞类型上,并且可以结合抗体且加重背景着色。我们建议使用 F(ab) 单体二抗来减少背景着色。
可减少一般背景着色的其他技巧: