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使用血球计数器进行细胞计数

使用血球计数器对悬浮细胞进行活细胞计数的实验方案


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准备血球计数器

  1.  如果使用玻璃血球计数器和盖玻片,请在使用前用酒精清洁。用水润湿盖玻片,并将盖玻片固定到血球计数器上。如果盖玻片下出现牛顿折射环,则表明盖玻片已正确附着。
  2.  如果使用一次性血球计数器(例如 INCYTO DHC-N01),只需在使用前将其从包装中取出。

准备细胞悬液

  1. 轻轻旋转培养皿 ,确保细胞均匀分布。
  2. 在细胞沉降前,用 5 mL 无菌移液器吸取 0.5 mL 细胞悬液并置于 Eppendorf 管中。
  3. 取 100 µL 细胞放入新的 Eppendorf 管中,加入 400 µL 0.4% 台盼蓝(最终浓度 0.08%)。轻轻混合。


计数

  1. 使用移液器取 100 µL 台盼蓝处理的细胞悬液,置于血球计数器上。如果使用玻璃血球计数器,则轻轻填满盖玻片下的两个室,使细胞悬液通过毛细管作用吸出。如果使用一次性血球计数器,则将细胞悬液加入计数室的孔中,使细胞悬液通过毛细管作用被吸入。
  2. 使用显微镜,在 10x 物镜下对焦到血球计数器的网格线。
  3. 使用手动计数器,对由16个方块组成的一组方块中未染色的活细胞(活细胞不能被台盼蓝染色)计数(图 1)。计数时,只计方块内或右边界及下边界线上的细胞。按同样的方法,必要时也可计数台盼蓝染色的死细胞以估计活细胞的比例。
  4. 移动血球计数器到下一组方块(16 个),继续计数,直至所有 4 组方块(每组16 个)均计数完毕。

活力

计算活细胞数量/mL:

  1. 计算每组方块(16 个)中细胞计数的平均值。
  2.  乘以 10000 (104)。
  3.  乘以 5,以修正加入台盼蓝时的 1:5 稀释。


最终值即是原细胞悬液中的活细胞数量/mL。

例:

  • ·如果每 16 个方块的细胞计数是 50、40、45、52,则平均细胞计数为:
  • (50 + 40 + 45 +52) ÷ 4 = 46.75
  • 46.75 x 10000 (104) = 467500
  • 467500 x 5 = 原细胞悬液中 2337500 个活细胞/mL

计算活力:

如果记录了每组(16 个)角落方块中的活细胞和死细胞数量,则可计算活力。

  1.   将活细胞和死细胞计数相加,得到总细胞计数。
  2.  活细胞计数除以总细胞计数即计算出百分比活力。

例:

  • 活细胞计数:2337500 个细胞/mL
  •  ​死细胞计数:50000 个细胞/mL
  • 2337500 + 50000 = 2387500 个细胞
  • 2337500 ÷ 2387500 = 97.9% 活力

图 1. 血球计数器网格线。
​​血球计数器示意图,显示用于计数的一组(16 个)方块。

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