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一抗或二抗的选择

如何找到最适于实验的一抗或二抗。

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应用

抗体数据表列出了我们已成功测试抗体的应用。如果抗体在应用中测试失败,则这类信息也会在数据表上注明。如果应用未列出,就表示我们尚未测试该应用并且不了解抗体的表现。

我公司内部会持续测试抗体,并将最新的应用信息更新到数据表。如需获得应用的相关帮助,请浏览我们的实验方案库.



​样品的性质

样品的性质决定哪个抗体最合适。考虑以下方面:

希望检测的蛋白质区域

在免疫原物质刺激下宿主动物发生免疫反应,产生抗体。免疫原可以是全长蛋白、蛋白质片段、多肽、整个生物体(例如细菌)或细胞。免疫原通常在数据表上有所描述(有些情况因专利原因无法提供对免疫原的确切描述)。

确认免疫原与您要检测的蛋白区域一致或包含在其内。例如,如果打算通过 FACS 检测活细胞上的细胞表面蛋白,请选择由蛋白的胞外区制备的抗体。

样品处理

有些抗体要求样品用特定方式处理。许多抗体仅能识别已还原和变性的蛋白质,因为这样露出了蛋白质折叠形成的二级和三级结构中隐藏起来的表位。另一方面,有些抗体仅能识别天然、折叠状态的蛋白质上的表位。除数据表上另有说明以外,我们用于蛋白质印迹的抗体要求样品经过还原和变性处理。

免疫组化中,有些抗体仅适用于未固定的冷冻组织。如果没有抗原修复步骤逆转福尔马林固定所引起的交联,那么其它抗体不能与福尔马林固定、石蜡包埋的组织中的靶标结合。这些使用上的限制会在数据表的应用章节中加以说明。



样品生物体

如果可能,选择与您的样品来源相同的生物体产生的抗体。

但抗体可与来自其它生物体的具有氨基酸序列高度同源性的相同靶蛋白反应。如果样品不是来自数据表中列出的生物体之一,这意味着该生物体尚未经过测试,我们不能证明其适用性。您可根据序列相似性对交叉反应性进行预测。



​选择一抗宿主生物体

产生一抗的生物体应与您的样品生物体不同。这是为了避免抗免疫球蛋白的二抗与样品中的内源性免疫球蛋白间发生交叉反应。例如,如果您研究小鼠蛋白,则应选择除小鼠以外的生物体产生的一抗。兔产生的一抗是合适的选择,然后可使用抗兔 IgG 二抗。

对于使用不包含内源性免疫球蛋白 (IgG) 的样品的技术,一抗宿主生物体的选择则不那么重要。例如,对预期不包含 IgG 的细胞裂解物进行的蛋白质印迹。然而,组织裂解物和组织培养物上清液(含血清)包含免疫球蛋白。对还原、变性样品进行蛋白质印迹时,IgG 会以 50 和 25 kDa 的条带显现,这两个条带分别对应于 IgG 分子的重链和轻链。



​选择二抗

二抗应对所用一抗的生物体产生免疫作用。例如,如果一抗是小鼠单克隆抗体,则您需要抗小鼠二抗。检查二抗的数据表,确认它已在您要使用的应用中测试过。



​选择用于双重染色的抗体

对细胞培养物或组织进行双重免疫染色时,要求一抗产生于不同生物体,并且二抗只识别其中一种生物体。选择我们的抗 Ig 二抗系列产品,它们已预吸附了来自其它生物体的免疫球蛋白,可避免交叉反应。或者,选择我们的直接偶联一抗,可消除对二抗的需求。



​荧光染料和色原标记物

标记物与抗体偶联,以显示目标蛋白的存在。标记物的选择取决于实验应用。

·         荧光标记物在特定波长的光激发下发出可见范围内的光。有多种荧光标记物可供选择,它们具有特有的激发和发射特性。

·         酶标记物辣根过氧化物酶 (HRP) 和碱性磷酸酶 (AP) 在与适当的底物混合时形成有色沉淀。

·         生物素化的抗体可用于放大信号,具体通过亲和素-生物素-酶或荧光染料复合物(通常缩写为 ABC 试剂)或者亲和素或链霉亲和素偶联到酶或荧光染料实现。



​其它有用资源