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我们是如何验证抗体的

进一步了解我们验证抗体所用的标准。

为获得精准的分析结果,您需要确保每一批次的抗体保持一致地结合到预期靶标。下面就为您简要介绍我们制备高品质抗体试剂时所采用的验证步骤,以便您首次使用即可获得精准结果。

不同应用所用的抗体验证方法大有不同,所以通常需要使用多种验证方法。为此我们采用了 ICC/IF、IHC、WB、流式细胞术、ELISA、IP、ChIP 和多肽芯片进行质量控制。这样就能确保采用最合适方法验证每一种抗体,并且所有产品均能够达到所需的活性、稳定性和性能。

基本标准

我们针对每一种应用采用特定的标准来判断抗体是否合格,并且通常我们会在多种应用中测试每一种抗体。上述标准包括特异性信号和相关对照等。以 RabMAb® 系列中的兔单抗为例,每种抗体都需要通过多项标准才能够纳入产品目录:

  • 必须能够针对主要应用(例如蛋白质印迹、免疫组化、免疫细胞化学、流式细胞术或染色质免疫沉淀)和物种(例如人、小鼠和大鼠)显示特异性信号
  • 尽可能同时使用阳性和阴性对照样品进行测试
  • 必须对所有可能的交叉反应进行记录并提供基于序列比对、内部测试和/或外部出版物的数据支持

如果抗体不符合上述标准,则该抗体被视为是不合格抗体,不会纳入产品目录。我们将研究重点放在特异性和一致性的原因是,我们深知二者对研究人员的重要性,这也是我们要对抗体进行附加测试的原因。

特异性测试

掌握抗体与靶标的结合特异性至关重要。我们通过持续的基因敲除 (KO)-验证项目来验证抗体特异性,该项目使用单倍体细胞模型的 CRISPR/Cas9 KO 人类细胞系。敲除模型是真正意义上的阴性对照,是抗体验证的绝佳标准品。

基因敲除模型通过观察基因功能缺失的表型来了解特定基因的功能,这正是该模型的强大之处。过去的一年,我们一直与 Horizon Discovery 合作对 500 余种抗体进行敲除验证,还将 200 种非特异性抗体从我们的产品目录中移除。敲除验证仅是我们为提高抗体质量标准所采取的众多步骤之一。


图 1.通过免疫组化法对 PD-L1 RabMAb (ab205921) 进行特异性测试 – 敲除 (KO) 测试:对 KO 细胞进行功能缺失检测。使用抗 PD-L1 抗体在人肺腺癌细胞系 L2987 中检测到明显的 IHC 信号。使用靶向人 PD-L1 转录变异体 1 (NM_014143.3) 外显子 4 的 TALEN 构建体编辑 L2987 细胞中的 PDL1 基因,并通过对克隆 L2-14 进行深度测序来确认完全基因敲除。L2987 L2-14 KO 细胞系中完全检测不到 IHC 信号。

图 2.通过流式细胞术对 PD-L1 RabMAb (ab205921) 进行特异性测试 – 敲除 (KO) 测试:对 KO 细胞进行功能缺失检测。使用靶向人 PD-L1 转录变异体 1 (NM_014143.3) 外显子 4 的抗 PD-L1 TALEN 构建体检测到了明显的信号,并通过对克隆 L2-14 进行深度测序来确认完全基因敲除。L2987 L2-14 KO 细胞系中几乎观察不到细胞表面染色。

一致性测试

除特异性外,我们还需要确认使用不同批次的同一抗体能否获得相同的结果。为确保这一点,我们通过一致性测试评估了每一批次间的差异。重组抗体的批间一致性非常高,因此您几乎不需要执行额外的批次间优化步骤(例如滴定实验)。但其他非重组型单抗和多抗则不同,这种情况下内部变异程度较高。

图 3.IHC 法批量测试 PD-L1 RabMAb (ab205921) – 分析 CHO PD-L1 表达细胞。A:兔 IgG,5 µg/mL 未染色;B:抗 PD-L1,2 µg/mL(第 1 批);C:抗 PD-L1,2 µg/mL(第 3 批);D:抗 PD-L1,2 µg/mL(第 4 批);E:抗 PD-L1,2 µg/mL(第 5 批);F:抗 PD-L1,2 µg/mL(第 6 批);G:抗 PD-L1,2 µg/mL(第 7 批)。所有批次 (1,3,4,5,6,7) 均显示了一致的结果。


提供最优质标准品

我们通过不同的验证技术,为您提供具有最佳特异性和一致性的抗体产品。多年来我们始终如此,这也是提升科学技术可靠性和可重现性的战略核心。


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