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RabMAb®抗体的多样和新颖的抗原表位识别能力

兔免疫系统产生与小鼠不同的亲和性。

这些不同主要归因于兔较低的免疫显性和较大的 B 细胞库。其优势在于抗体生成过程中更广泛的表位识别。这方面的案例见下文,通过比较兔和鼠免疫应答,表明在蛋白质印迹分析中,兔多克隆抗血清比小鼠多克隆抗血清能够识别更多的表位。

从我们的抗体研发过程中可见,兔免疫系统通常能产生更多种识别独特表位的抗体。

RabMAb vs mouse monoclonal comparison

此外,许多主要相关的人蛋白质靶标在小鼠和人之间高度保守。因此,这些蛋白质在使用小鼠或大鼠作为宿主时免疫原性往往较低。

使用兔作为宿主,利用其独特的免疫多样化和亲和性成熟机理,可生产能够识别各种表位的 RabMAb 一抗,从而发现更多的新抗体靶标。

案例研究:硫代磷酸酯 RabMAb 一抗 [51-8] (ab92570)

蛋白磷酸化是研究最广泛、最多的调控信号转导机制,该机制在真核和原核生物中都存在。该机制通过激酶向蛋白添加磷酸 (PO4),形成了细胞信号转导网络的基础,可控制多种蛋白性质(例如功能、结构)并参与所有基础细胞过程(123)。

但是,目标激酶 (KOI) 底物的生化鉴定一直是困难且受到技术限制的。这是因为大部分磷酸蛋白的丰度较低,并且激酶-底物相互作用具有低亲和性和亚化学计量磷酸化特点(14)。

为解决这一局限性,研究人员开发了直接激酶底物的生物正交亲和纯化和鉴定技术 (6)。

首先,KOI 接受 ATPγS,然后可对其直接底物进行硫代磷酸化。随后,底物上的硫代磷酸化位点被对硝基苄基硫代磷酸酯 (PNBM) 烷基化。最后,引入硫代磷酸酯特异性兔单克隆抗体(克隆 51-8)来识别标记的底物(该过程的图示见 Nature methods 2007 文献)。

半合成表位标记提供了识别和分离多种激酶底物的新方法(456)。

新 RabMAb 一抗可用于在 J. Allen 等人在 Nature methods 2007 报道的激酶反应之后检测含有硫代磷酸酯的激酶底物(见下图)。

RabMAb 一抗协助研究人员根据此方法研究感兴趣的激酶-底物关系。抗体也是与背景无关的,可识别多种激酶磷酸化共有基序中的丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸硫代磷酸化残基 (6)。

下载白皮书:利用硫代磷酸酯特异性单克隆抗体克隆 51-8 标记和识别新激酶底物的半合成方法

Thiophosphate ester

参考文献

  • 1. Johnson, S.A. and Hunter, T. Nature Methods 2, 17–25, 2005.
  • 2. Hunter, T. Signaling−2000 and beyond.Cell 100, 113−127, 2000.
  • 3. Cozzon, A.J. Ann. Rev. Microbiol. 42, 97–125, 1988.
  • 4. Cai, D, Article Review, Mol.BioSyst., 3, 516 – 517, 2007. 
  • 5. Allen, J.J. et al. J. Am. Chem. Soc., 127(15), 5288–5289, 2005. 
  • 6. Allen, J.J. et al.Nature Methods, 4(6), 511–516, 2007. (PubMed)


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