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1.使用 dH2O 制备 1 mM 的硫代磺素 T (ThT) 储液(新鲜制备且使用0.2 μm 过滤器过滤)。
2.使用 PBS (pH 7.4) 稀释 ThT,使每个孔的ThT终浓度为 25 μM。
3.使用前在冰上解冻 α-突触核蛋白(单体和聚合物)。
4.向相应的孔中加入 10 nM 聚合物或 100 μM 单体(或两者均加)。
5.使用膜封板并放置在 37℃ 的振荡孵育器 (600 rpm) 中。
6.使用荧光酶标仪(ex 450 nm,em 485 nm)检测ThT 荧光信号,在 37℃ 下读取1 到72 小时的值。
当10 nM α-突触核蛋白聚合物 (ab218819) 与 100 μM 活性 α-突触核蛋白单体 (ab218818)结合时 (浅蓝色图示),ThT荧光值随着时间的增加而增加(与 α-突触核蛋白聚集相关),较之其它实验组更高。包括100 μM 活性 α-突触核蛋白单体与 10 nM 对照 α-突触核蛋白聚合物结合(紫线图示),或100 μM 对照 α-突触核蛋白单体 (ab218816) 与 10 nM 对照 α-突触核蛋白聚合物 (ab218817)结合(深蓝色图示)。ThT ex = 450 nm,em = 485 nm。
图 1.图表显示与 α-突触核蛋白单体、聚合物和对照品相互作用后的 ThT 荧光。
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