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变量 | 考虑因素 |
抗原 | 物种、表达水平、样品类型 |
抗原表位 | 若已表位作图,考虑翻译后修饰 |
阳性和阴性对照,包括:不加一抗对照、同型对照、吸附对照、组织类型对照 | |
固定或冰冻 | |
灌注法或浸入法(是否冰冻) | |
固定剂 | 甲醛、乙醇或丙酮(包括浓度、pH、温度、孵育时间和稀释度) |
蛋白封闭(例如用血清或 BSA 封闭)防止非特异性结合,必要时封闭内源酶和生物素 | |
酶诱导抗原修复 (PIER) 或热诱导抗原修复 (HIER) | |
直接法或间接法(是否信号放大) | |
ABC、LSAB、聚合物或微聚合物 | |
单克隆或多克隆 | |
物种和标记 | |
化学显色法或荧光法 | |
标记物 | 荧光染料:取决于所需光谱性质 显色液:3,3-二氨基联苯胺 (DAB)、3-氨基-9-乙基咔唑 (AEC)、联苯胺盐酸盐 (BDHC)、3,3’,5,5’-四甲基联苯胺 (TMB)、新品红、5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐/硝基蓝四氮唑 (BCIP/NBT) |
荧光:例如 DAPI、DRAQ5™、DRAQ7™、核绿、Hoechst 化学显色:苏木精、伊红、组织学特殊染色 | |
荧光:抗荧光淬灭的水性封片介质 | |
成像和分析 | 荧光显微镜或标准显微镜;肉眼分析或成像软件分析 |