为了使您在Abcam官网的浏览体验更顺畅,请使用最新版本的浏览器比如 Google Chrome
Take a look at our BETA site and see what we’ve done so far.
Search and browse selected products
Purchase these through your usual distributor
Caspase-3是一种半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶,在细胞凋亡过程中起到关键作用,被广泛用作凋亡的生物标志物。
Caspase-3在凋亡过程中,被剪切成分子量分别为17kDa(p17)和12kDa(p12)的两个片段,并易位至细胞核。
Caspase-3经过剪切激活后,可以激活 caspase-6、-7 和 -9,形成凋亡级联反应。
Caspase-3参与了亨廷顿蛋白的降解。
Caspase-3参与了淀粉样蛋白的前体蛋白切割,与阿尔茨海默病中神经元的死亡有关。
在肺,脾,心脏,肝脏和肾脏中高度表达。
脑和骨骼肌内中水平表达,睾丸低水平表达。
在许多细胞系中表达,在免疫系统细胞中的表达最高。
在细胞质中表达,当受到刺激时,易位到细胞核。
图二:Caspase-3 ICC实验结果图,Anti-Caspase-3 antibody [E87] (ab32351)。绿色:Caspase-3,红色:Tubulin。 |
人(P42574):32kDa (预测)
小鼠(P70677):31kDa (预测)
大鼠(P55213):31kDa (预测)
Caspase-3被颗粒酶 B、caspase-6、caspase-8 和 caspase-10 切割后,会产生两个活性亚基。
Caspase-7 的小亚基和 caspase-3 的大亚基之间也会结合形成异二聚体。
未活化的caspase-3在其催化位点发生亚硝基化,凋亡途径激活后发生去亚硝基化。
请注意caspase-3存在多种蛋白形式,不同样本诱导后引起细胞凋亡的程度不同,最终检测到的蛋白条带大小可能会存在差异,包括约32 kDa的caspase-3前体(有些样本可能会观察到中间切割产物 29 kDa)、约17 kDa的剪切体(有些样本可能会观察到中间切割产物19 kDa)、约12 kDa的剪切体等。
caspase-3仅在细胞凋亡时才会被剪切,所以,大多数情况下样本无需药物处理即可检测到caspase-3前体蛋白;如果想要检测剪切后的Caspase-3,我们强烈建议诱导样本进入凋亡通路(eg:使用星形孢菌素处理样本,可作为给药组的阳性对照),同时,诱导后会观察到caspase-3前体蛋白含量的减少。
请注意不同抗体检测的caspase-3蛋白形式可能存在差异:比如,只能检测前体蛋白的ab32499,只能检测17 kDa剪切体的ab32042,能同时检测前体蛋白和17 kDa剪切体的ab32351,能同时检测前体蛋白和12 kDa剪切体的ab179517。
使用相同抗体检测不同种属的样本时,检测的caspase-3蛋白形式也可能存在差异:比如ab184787能够在人类样本(eg:Jurkat)中同时检测到caspase-3的前体和剪切体,但无法在小鼠和大鼠样本中检测caspase-3剪切体。
由于caspase-3存在多种翻译后修饰,在 WB 检测的条带大小可能与预测值不同。
caspase-3前体: HAP1、Jurkat、HeLa全细胞裂解液
caspase-3剪切体:星形孢菌素处理的HAP1、Jurkat、HeLa全细胞裂解液(诱导详情见产品说明书)
人CASP3 (Caspase-3) 敲除 HAP1细胞系/全细胞裂解液
图三:WB- Anti-pro Caspase-3 antibody [E83-103] (ab32499)。泳道1:HAP1全细胞裂解液泳道2:HAP1全细胞裂解液+ Staurosporine (1μM for 4h)泳道3:Caspase-3敲除的HAP1全细胞裂解液泳道4:Caspase-3敲除的HAP1全细胞裂解液+ Staurosporine (1μM for 4h)绿色条带大小:32 kDa(ab32499,pro Caspase-3)红色条带大小:37 kDa(ab8245,GAPDH) | |
图四:WB- Anti-Cleaved Caspase-3 antibody [E83-77] (ab32042)。泳道1:HAP1全细胞裂解液+ DMSO (24h)泳道2:HAP1全细胞裂解液+ Staurosporine (2μM for 24h)泳道3:Caspase-3敲除的HAP1全细胞裂解液+ DMSO (24h)泳道4:Caspase-3敲除的HAP1全细胞裂解液+ Staurosporine (2μM for 24h)泳道5:Hela全细胞裂解液+ DMSO (24h)泳道6:Hela全细胞裂解液+ Staurosporine (2μM for 24h)绿色条带大小:17 kDa(ab32042,Cleaved Caspase-3)红色条带大小:130 kDa(ab130007,Vinculin) | |
图五:WB-Anti-Caspase-3 antibody [EPR18297] (ab184787)。泳道1:未处理的Jurkat全细胞裂解液泳道2:1μM星形孢菌素处理4小时的Jurkat全细胞裂解液预测条带大小:32 kDa检测条带大小:17,32 kDa | |
图六:WB- Anti-Cleaved Caspase-3抗体[EPR21032] (ab214430)。泳道1:NIH/3T3全细胞裂解液泳道2:NIH/3T3全细胞裂解液+ Staurosporine (1μM for 4h)预测条带大小:31 kDa检测条带大小:17,19,24,29,32 kDa |
在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点: 样本制备 添加复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。 整个样本制备过程中,保持样本置于冰上。 通过Bradford分析、Lowry分析或BCA分析测定样本总蛋白浓度。 样本超声破碎可以富集细胞核蛋白并增强WB信号强度。 电泳 对于分子量较小的靶标蛋白(如分子量<25 kDa),请使用较高浓度15%的分离胶进行电泳。 至少上样20μg总蛋白进行电泳。 转膜 对于分子量较小的靶标蛋白,建议使用0.22μm的PVDF膜。 建议转膜完成后使用丽春红染色,确定转膜是否成功(如果选择荧光标记检测,请确保丽春红完全清洗干净)。 抗体孵育 请根据产品说明书选择最优的抗体工作浓度。 |