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一抗的选择是 IHC 实验成功的关键。一抗最重要的特征是它对靶抗原具有特异性。检测抗体时,可以直接通过与一抗偶联的标记物进行检测,也可以间接利用与一抗宿主种属、抗体类型、抗体亚型结合的标记二抗进行检测。利用荧光标记,或催化可溶性底物生成不溶性显色产物的酶,可使抗体可视化。
典型免疫染色实验方案的步骤如下。直接免疫染色法省略了二抗孵育这一步骤。荧光检测省略了最后一步,即底物添加步骤。
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